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Rekombinantes Enzym

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Modalität

Rekombinante Enzyme

Rekombinantes Enzym für therapeutische Zwecke

Durch biotechnologische Verfahren gewonnene therapeutische Enzyme werden häufig für verschiedene klinische Anwendungen eingesetzt, darunter Enzymersatztherapie, Abbau angesammelter Metaboliten und Toxine, Krebsbehandlung und Genombearbeitung. Im mikrobiellen Expressionssystem können mehrere therapeutische Enzyme produziert werden.

Anwendungs-

Enzyme

Substanz

Typische Produkte/Pipelines

Enzymersatztherapie

Adenosin-Desaminase, ADA

Adenosin oder Desoxyadenosin

Elapegademase-lvlr (Revcovi)

Phenylalanin-Ammoniak-Lyase, PAL

Phenylalanin

Pegvaliase-pqpz (Palynziq)

Abbau angesammelter Metaboliten

Uricase/Uratoxidase

Harnsäure

Peglticase (Krystexxa)Rasburicase (Fasturtec)

Kollagenase

Kollagen-„Narbe“

Kollagenase Clostridium histolyticum (Xiaflex, Qwo, Santyl)

Verkürztes Plasmin

Kollagen, Fibronektin und Laminin

Ocriplasmin (Jetrea)

Verkürzter Gewebeplasminogenaktivator (tPA)

Plasminogen

Reteplase (Retavase)

IgG-Protease

Immunglobulin G (IgG)

Imlifidase (Idefrix)

IgA-Protease

Immunglobulin A (IgA)

PKU308/AP308IGAN IgA-Protease

Abbau von Toxinen

Carboxypeptidase G2

Methotrexat

Glucarpidase (Voraxaze)

Krebsbehandlung

Asparagin-spezifisches Enzym

Asparagin

Asparaginase (Elspar)Calaspargase pegol-mknl (Asparlas)

Genom-Editierung

Cas9-Nuklease

Zielgen

Exagamglogene autotemcel (Exa-cel, CTX001)

Rekombinantes Enzym als Material

Es gibt mehrere Enzyme, die bei der Produktion langer kodierender RNA (z. B. mRNA, saRNA, circRNA), der Produktion von Antikörper-Wirkstoff-Konjugaten (ADCs) und anderen verwendet werden. Mikrobiell produzierte Enzyme sind kostengünstiger als das Expressionssystem von Säugetierzellen, insbesondere von E. coli.

Anwendungs-

Enzyme

Funktion

Enzyme für die lineare RNA-Produktion, RNase-frei

Restriktionsendonukleasen

Linearisierung der Plasmid-DNA (pDNA), um die Entstehung längerer Transkripte zu vermeiden.

T7-RNA-Polymerase (T7-RNAP)

Binden Sie an den T7-Promotor und erzeugen Sie ein spezifisches RNA-Transkript. Spielen eine Schlüsselrolle bei der In-vitro-Transkript-Reaktion (IVT).

Vaccinia-Capping-Enzym

Fügen Sie Cap-Strukturen an den 5′-Enden der IVT-mRNA hinzu.

Pyrophosphatase, anorganisch (iPPase)

Vermeiden Sie Pyrophosphat während der IVT-Reaktion.

RNase-Inhibitor, rekombinant

Hemmt die RNase-Aktivität während der IVT-Reaktion.

DNase I

Entfernen Sie die DNA-Vorlage.

Enzym zur circRNA-Produktion, RNase-frei

RNase R

Verdauen Sie lineare RNA und reichern Sie zirkuläre RNA an.

Enzymvermittelte Glykankonjugation

Peptid-N-Glycosidase (PNGase F)

Spaltt die Amidbindung zwischen dem ersten Saccharid GlcNAc und der Asn297-SeitenketteL; Setzen Sie Glykane aus IgG-Antikörpern frei.

Bakterielle Transglutaminase (BTG)

Konjugieren Sie Payloads standortspezifisch, um ADCs zu generieren.

Sortase A

Katalysieren Sie die Ligation von Proteinen.

β1,4-Galactosidase

Geben Sie alle terminalen Galaktosen frei und bilden Sie eine homogene G0-Isoform des Antikörpers.

β1,4-Galactosyltransferase (Gal-T)

Übertragen Sie einen Zuckerrest mit einer chemisch reaktiven funktionellen Gruppe.

α2,6-Sialyltransferase (Sial T)

Integrieren Sie terminale Sialinsäurereste in die native Glykanstruktur eines Antikörpers.

Enzymvermittelter Glykan-Remodelling und Glycoengineering

Endo-N-Acetylglucosaminidase (ENGase)

Hydrolysieren Sie die β1,4-glykosidische Bindung zwischen GlcNAcβ1–4GlcNAc von N-Glykanen; Entfernen Sie N-gebundene Glykane in der Fc-Region von IgG-Antikörpern.

Endoglykosidase S (EndoS)

Glykosyltransferasen (GTs)

Übertragen Sie N-Glykanoxazolin auf defucosylierte IgGs.

Andere

Von mikrobiellen Stämmen produzierte Enzyme

Maßgeschneiderter Bedarf

Rekombinantes Enzym als Reagenz
Tag-Entfernungs-Proteasen

Fusions-Tags werden häufig verwendet, um die Löslichkeit und Stabilität rekombinanter Proteine ​​von Interesse zu verbessern und ihre Reinigung zu erleichtern. Zu den häufig verwendeten Tags gehören His-Tag, Maltose-bindendes Protein (MBP), Glutathion-S-Transferase (GST) usw.

Typischerweise wird eine Linkersequenz zwischen der Fusionsmarkierung und der Zielproteinsequenz hinzugefügt, um die Markierung zu entfernen. Die Entfernung von Fusions-Tags erfordert ortsspezifische Proteasen wie Enterokinase (EK), Thrombin, Tabak-Etch-Virus-Protease (TEVp), humane Rhinovirus-Protease 3C (HRV3C), kleine Ubiquitin-modifizierende Protein-Protease (SUMO) und Tabak-Venen-Mottling-Virus ( TVMV)-Protease und Carboxypeptidase A/B (CPA/CPB).

Typ

Enzyme

Anerkennungsseite

Endoproteasen zur Markierungsentfernung

Enterokinase (EK), Enteropeptidase

DDDDK↓

Thrombin

LVPR↓GS

TEV-Protease

ENLYFQ↓G

HRV3C-Protease

LEVLFQ↓GP

SUMO-Protease

SUMO-Tertiärstruktur

TVMV-Protease

ETVRFQG↓S

Exoproteasen zur Markierungsentfernung

Carboxypeptidase A (CPA)

C-terminale Aminosäuren, außer Pro, Lys und Arg

Carboxypeptidase B (CPB)

C-terminales Lys und Arg

Andere Proteasen, Nukleasen und Amidasen

Anwendungs-

Enzyme

Funktion

Andere Proteasen

Protease K

Eine Serinprotease, die Proteine ​​durch Hydrolyse von Peptidbindungen verdaut.

IdeS, IgG-Protease

IgG-abbauende Enzyme (Ides), die an einer bestimmten Stelle von Immunglobulin G (IgG) spalten und dabei Fab- und Fc-Fragmente erzeugen

IgA1-Protease

Ein proteolytisches Enzym, das eine spezifische Stelle in der Sequenz der Gelenkregion des menschlichen Immunglobulins A1 (IgA1) spaltet.

Nuklease

Nuklease

Spaltt Nukleinsäuren (DNA oder RNA) durch Hydrolyse der Phosphodiesterbindungen.

Enzym einschränken

Eine Endonuklease, die DNA an oder in der Nähe bestimmter Stellen spaltet.

Amidase

PNGase F

Spaltt zwischen dem innersten N-Acetylglucosamin (GlcNAc) und den Asparaginresten von Oligosacchariden mit hohem Mannosegehalt, Hybrid- und komplexen Oligosacchariden.

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Referenz:

[1] Hennigan JN, Lynch MD. Vergangenheit, Gegenwart und Zukunft enzymbasierter Therapien. Drug Discov heute. 2022 Jan;27(1):117-133. doi: 10.1016/j.drudis.2021.09.004.

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