Kundenspezifische saRNA-Synthese
Selbstamplifizierende mRNA (saRNA), auch als Replikon-RNA bekannt, kodiert mRNA-Sequenzen für die In-vitro-Transkription (IVT) und virale Replikasegene, die von Alphaviren oder Flaviviren stammen. Virale Replikasegene ermöglichen die Selbstamplifikation der mRNA, was zu einer erhöhten Proteinexpression und einer minimalen erforderlichen RNA-Dosis im Vergleich zu nicht amplifizierenden mRNAs führt. Ein weiterer Aspekt ist, dass saRNA ein relativ großes Molekül ist (mehr als 14 kb).
Yaohai Bio-Pharma hat eine Reihe von mRNA-Synthesetechnologien entwickelt, um nicht-amplifizierende mRNA und selbstamplifizierende mRNA (1000 nt~14000 nt) bereitzustellen, wie Sequenzdesign und -optimierung, IVT, Reinigung, Gefriertrocknung und Verkapselung von Lipid-Nanopartikeln (LNP). Alle Produkte werden unter strengen Qualitätskontrollstandards freigegeben.
Abb. 1 Strukturelle Merkmale von IVT-mRNAs: konventionelle, zirkuläre und selbstverstärkende mRNA.
Sequenzmerkmale selbstamplifizierender mRNA
Die selbstverstärkende RNA besteht aus vier nichtstrukturellen Proteinen (bezeichnet als nsP1, nsP2, nsP3 und nsP4), die von Alphaviren, dem venezolanischen Pferdeenzephalomyelitisvirus (VEEV), stammen. Unter diesen weist nsP1 eine doppelte enzymatische Aktivität auf, nämlich GTase und N7MTase, während nsP2 RTPase-Aktivität besitzt, die für die Kappe der IVT-mRNA zur Erzeugung der Cap-0-Struktur entscheidend ist. Darüber hinaus dient nsP2 als Protease und Helikase und erleichtert die komplexe Verarbeitung des gesamten nsP-Komplexes. Die genaue Funktion von nsP3 ist noch unklar, doch es interagiert mit verschiedenen Proteinen der Wirtszelle und trägt so zur Abschwächung der antiviralen Reaktion des Wirts bei.
Vor dem Gen von Interesse (GOI) befindet sich eine subgenomische Promoterregion des Alphavirus (SGP). Das SGP-Element erleichtert die Einleitung der GOI-Transkription, indem es das Lesen der Sequenz umgeht, die virale nsP-Proteine kodiert.
Abb. 2 Synthese und Zellanalysen von eGFP saRNA der RNASci-Plattform von Yaohai Bio-Pharma.
Kundenspezifische Lösungen von saRNA
Das Syntheseprotokoll von saRNA ähnelt dem von mRNA: Kundenspezifische mRNA-Synthese
- Sequenzdesign
- Vorbereitung der Plasmid-Matrize
- In-vitro-Transkription (IVT)
- mRNA-Enzym-Capping
- mRNA-Co-Transkriptions-Capping
- mRNA-Reinigung
- mRNA-Lyophilisierung
- LNP-Kapselung
- Analyse und Prüfung
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