Die durch In-vitro-Zyklisierung und RNase-R-Anreicherung gewonnenen Produkte müssen weiter von der In-vitro-Transkription (IVT) entfernt werden, einschließlich nicht verbrauchter Substrate in der Zyklisierungsreaktion, Reaktionsnebenprodukte und Nicked-RNA.
Yaohai Bio-Pharma verfügt über ausgereifte LiCl-Fällung, magnetische Kügelchenreinigung, selbst entwickelte Reinigung und andere diversifizierte Reinigungslösungen, um verschiedene Verunreinigungen wirksam zu entfernen und hochreine circRNA herzustellen.
Aufreinigungslösung für kleine Mengen circRNA für die Zelltransfektion und im Rahmen von Tierversuchen.
Aufreinigungslösung für kleine Mengen circRNA für die Zelltransfektion und im Rahmen von Tierversuchen.
Anwendungsszenarien mit höherer Qualität;
Stabiler und skalierbarer Reinigungsprozess zur Erfüllung der GMP-Produktionsanforderungen.
Prozess | Optionaler Service | Service Details | Lieferzeitraum (Tag) | Leistungen |
circRNA-Reinigung | Konventionelle Reinigungslösung | Lithiumchlorid-Ausfällung | 1 | circRNA-Wirkstoff |
Magnetische Perlenreinigung | ||||
Hochreine circRNA-Reinigung | Präparative Hochleistungsflüssigchromatographie (HPLC) | 1 2 | ||
Pufferaustausch | Ultrafiltration | 1 | ||
circRNAQualitätskontrolle | Konzentrieren / Reinigen | Ultraviolett (UV)-Spektrophotometrie | 0.5 | Testbericht |
Purity | Agarosegelelektrophorese (AGE)/E-Gel | |||
HPLC-optional | 1 |
Anwendungsszenarien können realisiert werden.
circRNA mit einer Reinheit von über 90 %;
Durch strenge Kontrolle der RNasen in der Versuchsumgebung und den Verbrauchsmaterialien wird der RNA-Abbau wirksam verhindert.
Yaohai Bio-Pharma hat eine ausgereifte circRNA-Reinigungslösung entwickelt, mit der verschiedene prozessbedingte Verunreinigungen wirksam entfernt werden können.
Die mit der herkömmlichen Lösung gereinigten zirkulären RNA-Produkte sind offensichtlich noch immer mit Nicked RNA und Introns vermischt.
Nach der von Yaohai Bio-Pharma entwickelten Reinigungslösung können verschiedene lineare RNA-Verunreinigungen wie Nicked RNA und Introns erfolgreich entfernt werden.
Validierung der circRNA-Expression
Mithilfe eines herkömmlichen Liposoms wird gereinigte eGFP-circRNA in 293T-Zellen transfiziert. Nach 24 Stunden ist ein Fluoreszenzsignal zu beobachten, das nach 48 Stunden noch verstärkt ist. Das Fluoreszenzsignal ist noch am 7. und 14. Tag nach der Transfektion nachweisbar.