Im Herstellungsprozess von mRNA für die In-vitro-Transkription (IVT) wird linearisierte Plasmid-DNA als Transkriptionsvorlage für die IVT mit Hilfe der T7-RNA-Polymerase benötigt. Hochwertige Plasmid-DNA ist für die In-vitro-Transkription von entscheidender Bedeutung.
Basierend auf der ausgereiften Serviceplattform zur Plasmidherstellung kann Yaohai Bio-Pharma einen Service zur Herstellung linearer Plasmid-DNA mit hoher Reinheit und hohem Standard anbieten, um eine effiziente IVT-Transkription zu erreichen.
Details zu den Dienstleistungen
| Prozess | Optionaler Service | Service Details | Lieferzeit (Werktage) |
| Herstellung zirkulärer Plasmide | Gensynthese | Gensynthese (Drittanbieter) | 7 - 10 |
| Plasmidamplifikation | Plasmidamplifikation | 2 |
| Plasmidextraktion |
| Linearisierte Plasmidpräparation | Plasmidlinearisierung und -reinigung | Plasmidlinearisierung | 1 |
| Linearisierung DNA-Reinigung |
| Plasmid-DNA-Qualitätskontrolle | Konzentration Reinheit | Ultraviolett (UV)-Spektrophotometrie | 1 - 2 |
| Plasmidkonformation | Agarosegelelektrophorese (AGE) |
| Kapillarelektrophorese (CE)-optional |
| Plasmid identifizieren | Identifizierung von Restriktionsenzymen/ AGE |
Unsere Eigenschaften
Flexible Auswahl von Linearisierungsmethoden
- Hohe Wiederherstellungsrate
Optimierung der DNA-Extraktions- und Reinigungsmethoden zur Erzielung hoher Rückgewinnungsraten.
- Strenge Qualitätskontrolle
Strenge Prozesskontrollstandards mit einer superhelikalen Konformationsrate von Plasmidproben für Forschungszwecke von über 80 %.
- Ausgereifter Plattformprozess
Hochwertige und hocheffiziente Plasmidpräparation und Qualitätskontrolldienste zur Erfüllung experimenteller Anforderungen.
Fallstudie
Am Beispiel des mRNA_Luciferase-Produkts aus dem Katalog von Yaohai Bio-Pharma weist die Transkriptions-Vorlagenplasmidprobe (Forschungsqualität) ein Superhelix-Verhältnis von über 90 % auf, ein Linearisierungsverhältnis von nahezu 100 % und ein nachfolgendes Transkriptionsverhältnis von bis zu 1:200 (linearisierte Plasmid-DNA:mRNA).
Die durch die Herstellung eines linearisierten Plasmids als Vorlage gewonnene mRNA_Luciferase wird in 293T-Zellen transfiziert und die Enzym-Substrat-Reaktionsaktivität wird 24 Stunden nach der Transfektion ausgewertet.
Es ist ein deutliches, starkes Luciferase-Aktivitätssignal erkennbar, d. h. das Luciferase-Protein wird effizient exprimiert, was darauf schließen lässt, dass die Reinheit der Transkriptionsvorlage die Anforderungen an eine qualitativ hochwertige mRNA-Präparation vollständig erfüllen kann.
Supercoiled-Plasmid-Verhältnis-Assay
Validierung der Luciferase-mRNA-Expression in vitro
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