Die Präparation von circRNA erfordert lineares RNA als Vorläufermaterial (RNA-Vorläufer) für die Zyklierung, wobei das RNA-Vorläufermaterial normalerweise unter Verwendung linearisierter Plasmid-DNA als Transkriptionsvorlage und in vitro mit Hilfe von T7 RNA-Polymerase transkribiert wird.
Hochwertige Plasmid-DNA ist essenziell für die in vitro Transkription (IVT). Auf Basis der reifen Plasmid-Präparationsdienstleistungsplattform kann Yaohai Bio-Pharma einen Dienst zur Präparation von hochreiner und standardisierter linearisierter Plasmid-DNA (pDNA) anbieten, um die Integrität der IVT-Produkte zu gewährleisten.
Dienstleistungen Details
| Prozess |
Optionale Dienstleistungen |
Service Details |
Lieferzeit (Arbeitstag) |
| Vorbereitung zirkulärer Plasmide |
Gen-Synthese |
Gensch Synthese (Drittanbieter) |
7 bis 10 |
| Plasmidvermehrung |
Plasmidvermehrung |
2 |
| Plasmidextraktion |
| Präparation von linearisierten Plasmiden |
Linearisierung und Reinigung von Plasmiden |
Plasmidlinearisierung |
1 |
| Reinigung von linearisiertem DNA |
| Qualitätskontrolle von Plasmid-DNA |
Konzentration Reinheit |
Ultraviolett (UV) Spektrophotometrie |
1-2 |
| Plasmidkonformation |
Agarose-Gel-Elektrophorese (AGE) |
| Kapillarelektrophorese (CE) - Optional |
| Plasmid identifizieren |
Restriktionsenzym-Identifikation / AGE |
Unsere Funktionen
Flexible Auswahl von Linearisierungsmethoden
Optimierung der DNA-Extraktions- und -reinigungsverfahren, um hohe Rückgewinnungsquoten zu erreichen.
- Strenge Qualitätskontrolle
Strenge Prozesskontrollstandards, mit einer Überlagerungsrate von Plasmidproben für Forschung von über 80 %.
- Reifes Plattformverfahren
Dienstleistungen zur hochwertigen und effizienten Plasmidvorbereitung und Qualitätssicherung, um experimentelle Anforderungen zu erfüllen.
Fallstudie
Am Beispiel des Produkts mCherry circRNA von Yaohai Bio-Pharma: Der Überlagerungsanteil der Transkriptionstemplat-Plasmidproben (Forschungsqualität) beträgt mehr als 70 %, mit einer Linearisierungsrate von nahezu 100 %.
mCherry circRNA wird mit linearisierter Plasmid-DNA als Vorlage vorbereitet und in 293T-Zellen transfektiert. Ein hoher Ausdruck von Fluoreszenz (rote Fluoreszenz) wird 24 Stunden nach der Transfektion detektiert, was nach 48 Stunden verstärkt wird und auch am 7. und 14. Tag nach der Transfektion noch detektiert werden kann.
mCherry-Protein wird stabil und effizient exprimiert, und die Reinheit des transkriptionellen Templates kann die Anforderungen an ein hochwertiges circRNA-Medikament (DP) erfüllen.
In-vitro-Ausdrucksvalidierung von mCherry circRNA
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