Im Vergleich zur zweistufigen enzymatischen Capping-Methode kann die einstufige Ko-Transkriptionsmethode den Prozess erheblich vereinfachen. Diese methode istergebnisorientiert und beinhaltet die Zugabe von Cap-Analoga zur in vitro Transkription (IVT). Cap-Analoga können zu Beginn der Transkription eingeführt werden, und nach Abschluss der Transkription wird mRNA mit Cap-Struktur erhalten. Aktuelle drittgenerationelle Cap-Analoga können Rückwärts-Capping vermeiden und direkt die Cap 1-Struktur zum Transkriptionsprodukt hinzufügen.
Bei der Berücksichtigung der in vivo Immunogenität von mRNA und der Übersetzungs-effizienz wird im IVT-Prozess oft eine bestimmte Art von modifizierten NTPs verwendet, und gebräuchliche modifizierte Nukleotide sind Pseudouridin (Ψ), N1-Methyl-Pseudouridin (N1Ψ) und 5-Methylcytosin (5mC).
Abbildung: Diagramm der mRNA Ko-Transkription und Capping-Reaktion
Service Details
Service |
Service Details |
Lieferzeit (Arbeitstag) |
Ko-Transkriptionelles Capping |
In vitro Transkriptionsantwort (Clean Cap Analog) |
1-2 |
| Nukleotidmodifikationen (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| DNA-Vorlagenentfernung (DNase I) |
Optimierung der IVT-Bedingungen - optional |
Design und Optimierung der Reaktionskomponenten |
3-7 |
Unsere Funktionen
- Verschiedenartige Nukleotidmodifikationsstrategien
Mehrere optionale Nukleotidmodifikationsstrategien können die Proteinausdrucksteuerung verbessern.
- Optimiertes Reaktionssystem
Erreichen eines hohen Transkriptionsverhältnisses und einer hohen Kappeffizienz.
Erreichen Sie eine Verschlusssrate von mehr als 95%.
- Strenge Kontrolle von RNasen
Verhindern Sie effektiv die Degradation von mRNA, indem Sie die RNase im experimentellen Umfeld und in den Verbrauchsmaterialien streng kontrollieren.
Fallstudie
Yaohai Bio-Pharma hat eine reife Plattform für das co-transkriptionelle Verschlussover entwickelt. Dabei werden saubere Cap-Analoga verwendet, um während der Transkription direkt die Cap1-Struktur hinzuzufügen, wobei ein reverses Verschlusen vermieden wird. Nach standardisierter Probenvorbehandlung und Kapillarelektrophorese (CE)-Detektion erreicht die Verschlusssrate des verstärkten grünen fluoreszierenden Proteins (eGFP) mRNA mehr als 95%.
verschlusseffizienz der eGFP mRNA von mehr als 95%
Die durch co-transkriptionelles Verschlusen vorbereiteten eGFP mRNA und mCherry mRNA werden jeweils in 293T-Zellen transfektiert, und nach 48 Stunden wird ein starker fluoreszierender Signal beobachtet, was darauf hinweist, dass die mRNA effizient in den 293T-Zellen exprimiert wird.
Expression von eGFP mRNA und mCherry mRNA in 293T-Zellen
DE
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
