die 5'-Ende Kapierung ist eine wesentliche Modifikation des mRNA. mRNA mit Kapstrukturen, insbesondere Cap1-Strukturen, ermöglichen es dem mRNA, angeborene Immunreaktionen im Organismus zu vermeiden, was zu einer effizienten Proteinsynthese führt.
Die enzymatische Kapierung (die Zweischritt-Methode) ist die konventionelle Methode der mRNA-Kapierung, ähnlich dem Kapierungsprozess in eukaryotischen Organismen. Unter der Wirkung einer Reihe von Enzymen wird 7-Methylguanin (m7G) an das 5'-Ende des mRNA über einen 5'-5' Triphosphat-Bindungsstrang gekoppelt und durch Methylierungsmodifikation zur Cap1-Struktur (m7GpppN) verarbeitet.
Diagramm der natürlichen Kapierungsstrukturbildung
Der Reaktionsfluss der enzymatischen Kapierung sieht wie folgt aus:
Lineare Plasmid-DNA wird als Vorlage für die in vitro Transkription (IVT) in Gegenwart von T7-Polymerase verwendet, und mRNA mit einer 5'-End-Kapstruktur wird nach einer Ein-Schritt-Reinigung unter Verwendung des Vaccinia-Kappierungs-Enzyms und der 2'-O-Methyltransferase gebildet.
Dienstleistungen Details
Optionale Dienstleistungen |
Service Details |
Lieferzeit (Tag) |
enzymatische mRNA-Kappenbildung |
Enzymatische Kappierungsraktion |
1 |
Optimierung der Kappierungsraktion - optional |
Design und Optimierung der Reaktionskomponenten |
3~7 |
Unsere Funktionen
- Design und Optimierung der Kappierungsraktionskomponente
Die Kappierungskomponente wird optimiert, und die Produktion des mRNA-Transkripts wird erheblich erhöht.
- In vitro Ausdruckverifikation
Das gekappierte mRNA wird in 293T-Zellen transfektiert, und der Ausdruck des Zielproteins kann detektiert werden.
- Strenge Kontrolle von RNasen
Durch strenge Kontrolle der RNasen in der Versuchsumgebung und den Verbrauchsmaterialien wird die Degradation von mRNA wirksam verhindert.
Fallstudie
Die mRNA-Plattform von Yaohai Bio-Pharma hat einen perfekten Capping-Reaktionsprozess entwickelt.
Bei eGFP-mRNA kann ein hoher eGFP-Fluoreszenzschein (Grünes Fluoreszenzlicht) nach der Transfektion von 293T-Zellen innerhalb von 24 Stunden beobachtet werden, was durch Western Blot (WB) nachgewiesen wurde. Dies zeigt, dass das Zielprotein Enhanced Green Fluorescent Protein (eGFP) effizient im Reagenzglas exprimiert werden kann.
Expression enzymatisch gecapper eGFP-mRNA in 293T-Zellen
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