Plasmid-DNA, wie in vitro Transkriptionsvorlage (IVT) ist ein wichtiger Rohstoff für die mRNA-Herstellung. Hohe Ausbeute, hohe Reinheit und hohe Rückgewinnung von Plasmid-DNA sind die wichtigsten Ziel während der Plasmidprozessentwicklung.
Yaohai Bio-Pharma bietet eine Komplettlösung für die Plasmidentwicklung, einschließlich Upstream- (Fermentation), Downstream- (Reinigung) Prozessentwicklung, Prozesscharakterisierung und Prozessvalidierung. Wir verfügen über umfangreiche Erfahrung bei der Verbesserung der Plasmidausbeute und der Isolierung von Plasmiden aus komplexen Matrizen durch die Entwicklung und Optimierung von Fermentations-, Reinigungs- und Verunreinigungenentfernungsprozessen.
Der grundlegende Bioprozess zur Plasmidherstellung umfasst: Escherichia coli (E. coli) Fermentation, Zellernte und alkalische Lyse, Klärung, Konzentration, dreistufiger Chromatographieprozess (Erfassung, Zwischenreinigung und Politur) und Konzentration.
Service Details | Einheitsbetrieb | Parameter |
E. coli Fermentation |
Kolben schütteln | Medienzusammensetzungen, Antibiotikum, Inokulumvolumen, Wachstumstemperatur usw. |
Fermenter (7 l) |
Antibiotikum, Inokulumvolumen, Wachstumstemperatur, pH-Wert, gelöster Sauerstoff (DO), Fütterungsmodus (z. B. Fed-Batch), Fütterungsmedium, Fermentationszeit usw. |
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Zellernte | Mikrofiltration | Standard E. coli Ernteprozess |
Zelllyse | Zellsuspendierung, alkalische Lyse, Neutralisation | Alkaliverhältnis, Lysezeit |
Klärung | Filtration | Grobfiltration, 20 µm und ein 5 µm Filterzug (bevorzugt) |
Konzentration | Ultrafiltration, Tangentialflussfiltration | Porengröße (oder NMWC), Transmembrandruck (TMP), Fluss, Verhältnis Filtratvolumen zu Membranfläche |
Dreistufige Chromatographie | Größenausschlusschromatographie (SEC) oder Gelfiltrationschromatographie (GFC) | Säulenlänge und -durchmesser, Pufferzusammensetzung, Injektionsvolumen, Zusammensetzung der mobilen Phase (Adsorption und Desorption), pH-Wert, Flussrate, Äquilibrierung, Bindung, Waschen und Elutionsbedingungen. |
Affinitätschromatographie (AF) | ||
Anionenaustauschchromatographie (AEX) | ||
Konzentration | Ultrafiltration, Tangentialflussfiltration | Porengröße (oder NMWC), Transmembrandruck (TMP), Fluss, Verhältnis Filtratvolumen zu Membranfläche |
Weitere Prozesslösungen für die Aufreinigung biologischer Präparate |