Plasmid-DNA, als in vitro transkription (IVT) Vorlage, ist ein wichtiges Rohmaterial für die Herstellung von mRNA. Hohe Ausbeute, hohe Reinheit und hohe Erholung von Plasmid-DNA sind die Hauptaspekte ziel während der Plasmid-Prozessentwicklung.
Yaohai Bio-Pharma bietet eine umfassende Lösung für die Plasmid-Entwicklung, einschließlich Aufstrom (Fermentation), Abstrom (Reinigung) Prozessentwicklung, Prozesscharakterisierung und Prozessvalidierung. Wir haben umfangreiche Erfahrung in der Verbesserung der Plasmid-Ausbeute und dem Isolieren aus komplexen Matrizen durch Entwicklung und Optimierung von Fermentations-, Reinigungs- und Schadstoffentfernungsschritten.
Der grundlegende Bioprozess für die Plasmidherstellung umfasst: Escherichia coli (E. coli) fermentation, Zellharvest und alkalische Lysierung, Klarifizierung, Konzentration, dreistufigen Chromatographieprozess (Auffang, Zwischenreinigung und Polieren) und Konzentration.
Service Details | Einzeloperationen | Parameter |
E. coli fermentation |
Schüttelflasche | Medienzusammensetzung, Antibiotikum, Inokulumvolumen, Wachstumstemperatur und usw. |
Fermenter (7 L) |
Antibiotikum, Inokulumvolumen, Wachstumstemperatur, pH, gelöster Sauerstoff (DO), Fütterungsmodus (z. B. fed-batch), Fütterungsmedium, Fermentationszeit und usw. |
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Zellenernte | Mikrofiltration | Standard E. coli ernteprozess |
Zelllyse | Zellresuspension, alkalische Lyse, Neutralisierung | Alkaligehalt, Lysierzeit |
Klärung | Filtration | Rohfiltration, 20 µm und eine 5 µm Filterkombination (präferiert) |
Konzentration | Ultrafiltration, tangentialer Flussfilter | Porengröße (oder NMWC), Transmembrandruck (TMP), Fluss, Filtratvolumen zu Membranflächenumfang |
Dreistufige Chromatographie | Größenexklusionschromatographie (SEC) oder Gelfiltrationschromatographie (GFC) | Spaltenlänge und -durchmesser, Pufferzusammensetzung, Injektionsvolumen, mobiles Phasenzusammengesetzt (Adsorption und Desorption), pH, Durchflussrate, Aushaltung, Bindung, Spülung und Elutionsbedingungen. |
Affinitätschromatographie (AF) | ||
Anionenaustauscherchromatographie (AEX) | ||
Konzentration | Ultrafiltration, tangentialer Flussfilter | Porengröße (oder NMWC), Transmembrandruck (TMP), Fluss, Filtratvolumen zu Membranflächenumfang |
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