Die Bedeutung des Stammscreenings
Das Screening geeigneter Wirte ist für die Entwicklung von CMCs für Biologika erforderlich, da es die Qualität und Konsistenz des Produkts und des Herstellungsprozesses bestimmt. Das direkte Ziel des Wirtsscreenings besteht darin, eine Kandidaten-Primärzellbank (PCB) mit hohen Expressionsniveaus und hoher Stabilität sowohl in Bezug auf Passagestabilität als auch Lagerstabilität bereitzustellen. Das Screening geeigneter Wirte ist aus zwei Hauptgründen erforderlich:
- Zunächst muss der mikrobielle Wirt mit einem hohen Expressionsniveau ausgewählt werden. Es gibt mehrere kommerziell erhältliche Stämme, die zur Expression verschiedener Proteintypen verwendet werden, wie etwa toxische Proteine, lösliche Proteine oder eukaryotische Proteine.
- Zweitens, um den Wirt auf genetische Stabilität zu prüfen. Die Prüfung der genetischen Stabilität ist ein wichtiger Punkt während des gesamten Produktionslebenszyklus. Es wird vorgeschlagen, dass eine hohe genetische Stabilität als weiteres Schlüsselmerkmal für einen geeigneten Stamm angesehen wird.
Schlüsselwörter: mikrobielle Stammauswahl, mikrobielles Stammscreening, Hochdurchsatzscreening von Bakterien oder Hefen, Screening hochproduktiver Stämme, Screening hochstabiler Stämme, Screening genetisch stabiler Stämme. Anwendung: Humanmedizin, Tiermedizin, Impfstoff, synthetische Biologie, rekombinante Biologika mit großen Molekülen, biologisches Reagenz.
Stammscreening-Dienste von Yaohai Bio-Pharma
Wir profitieren von über 10 Jahren Erfahrung als CDMO im Bereich mikrobieller Biologika und unterstützen die Entwicklung und Herstellung verschiedener großer Moleküle, darunter rekombinante Untereinheitenimpfstoffe, virusähnliche Partikel (VLP), Hormone (Insulin, GLP-1, Wachstumshormon), Zytokine (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21), Wachstumsfaktoren (EGF, FGF, NGF), Nanobodies/Einzeldomänen-Antikörper (sdAbs), Enzyme usw.
Wir haben umfangreiche Erfahrungen in der Auswahl verschiedener Arten von Plasmidvektoren und mikrobiellen Wirten, einschließlich Bakterien, gesammelt. Escherichia coli (E. coli), und Hefe Pichia pastoris (P. pastoris), Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae), Hansenula polymorpha (H. polymorpha). Wir finden das beste Expressionssystem für Ihre einzigartigen Biologika.
Wir sammelten verschiedene mikrobielle Wirte mit eindeutigen Quellen und Standard-CoA, darunter E.coli Ausdruck und Hefeausdruck.
Service Details
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Leistungen
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Service Details
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Minimaler Zeitrahmen/Tag
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Leistungen
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Stammkonstruktion (E. coli)
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Plasmidtransformation (mehrere Wirte)
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5
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COA von kommerziellen Wirten Bericht zur Stammkonstruktion
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PCR-Verifizierung
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Stammreinigung
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Dehnungserhaltung
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Stammaufbau (Hefe)
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Herstellung kompetenter Hefezellen
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10
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Plasmidlinearisierung
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Elektrotransformation
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Resistenz-/Mangelscreening
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Stammreinigung
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Dehnungserhaltung
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Geeignetes Wirtsscreening
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Plasmid- oder Genom-DNA-Extraktion
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15-20
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Wirtsscreening-ProzessCOA von gentechnisch veränderten Stämmen
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PCR-Verifizierung, Restriktionsenzymverdau
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Zielgensequenzierung
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Screening von Wirten mit hoher Expression
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Screening von Wirten mit genetischer Stabilität
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Dehnungserhaltung
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Fallstudie
Ein geeigneter Wirt verbessert das Proteinexpressionsniveau um das 2.5-fache.
Wir sind beauftragt, hochproduktive E. coli Stamm. Und wir haben drei Arten von kommerziellen E. coli Wirte, basierend auf den Eigenschaften des Zielproteins. Es hat sich gezeigt, dass die Stämme S1-1 und S1-2 (Abb. A: Spur 1,2) den Proteinspiegel um das 3.5-fache gegenüber dem ursprünglichen Stamm des Kunden (Abb. A: Spur 3) verbesserten.
Darüber hinaus wies der Stamm S1-1 eine hohe genetische Stabilität auf (Abb. B) und wurde als Kandidatstamm für die primäre Zellbank (PCB) anerkannt.
Unsere Servicefunktionen
Nachgewiesene Expertise mit verschiedenen mikrobiellen Wirten, zB E. coli DH5α, TOP10, Trans10, BL21; P. pastoris SMD1168H, X-33, GS115, PichiaPink-Stamm 1/2/3/4; S. cerevisiae und H. polymorpha.
Wir haben Erfahrung mit E. coli periplasmatische Sekretion, lösliche und Einschlusskörper-Expression sowie intrazelluläre oder sekretorische Expression der Hefe. Wir fügen keine Antibiotika hinzu oder fügen die Antibiotika nur unter behördlichen Auflagen hinzu.
Wir erstellen eine Hochdurchsatz-Screening-Plattform, um aus über einhundert Kandidatenstämmen ertragreiche und stabile Stämme auszuwählen.
Im Rahmen des Good Data and Record Management wird sichergestellt, dass der Prozess der Stammentwicklung und des Screenings nachvollziehbar ist.
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