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Disulfidbrücken

Analyse von Disulfidbrücken

Disulfidbrücken werden manchmal auch S-S-Brücken oder Disulfidbrücken genannt. Disulfidbrücken beeinflussen die Biowirksamkeit von Biologika, wie Peptiden, Proteinen und Antikörpern.

Yaohai Bio-Pharma bietet Analysedienstleistungen für Disulfidbrücken hauptsächlich auf der Basis von Flüssigchromatographie-Massenspektrometrie (LC-MS).

Wir waren in der Charakterisierung der Proteinstruktur verschiedener großer Moleküle involviert, darunter Rekombinante Subeinheitsimpfstoffe, Nanobody/VHHs/Einzeldomänen-Antikörper (sdAbs), Antikörperfragmente, Hormone/Peptide, Interleukine, Wachstumsfaktoren (GF), Enzyme, Kollagene usw.

Regulatorische Anforderungen für Disulfidbrücken

Es gibt unterschiedliche Anzahlen und Formationen von Disulfidbrücken in verschiedenen Biologika, die bei den Studien zur Proteincharakterisierung vollständig bewertet werden sollten, wenn die erwartete primäre Aminosäuresequenz des Produkts die Aminosäure Cystein enthält. Dies wird auch vom regulatorischen Dokument ICH Thema Q6B gefordert.

Analytische Methoden
Analyse Methoden
Disulfidbrücken Flüssigchromatographie-Massenspektrometrie (LC-MS) nach Verdauung

Für die notwendigen Daten zur vollständigen Bewertung von Disulfidbrücken und freien Thiole führen Wissenschaftler von Yaohai Bio-pharma eine Peptidkartierung nach Verdauung mit einem spezifischen Proteasen durch. Anschließend wird analysiert, indem On-line LC/ Elektrospray-Ionisations-Massenspektrometrie (ES-MS) und/oder LC/ES-MS/MS vor und nach der Reduktion verwendet wird.

Yaohai Bio-pharma kann auch den Ellman-Test durchführen, der einen wichtigen Bestandteil jeder vollständigen Bewertung eines cysteinhaltigen Produkts darstellt. Im Rahmen des Ellman-Tests derivatisieren wir Sulfhydrylgruppen mittels (5,5’-Dithio-bis-[2-Nitrobenzoessäure]). Um die Konzentration freier Thiole zu bestimmen, wird das resultierende Produkt durch UV-Spektrophotometrie bei 412 nm analysiert.

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