Minicircle DNA (mcDNA) ist ein kleinerer nicht-viraler DNA-Vektor, der von einer DNA-ähnlichen Struktur des Elternplasmids abgeleitet ist. Minicircle-DNA unterscheidet sich von herkömmlicher Plasmid-DNA dadurch, dass sie Promotor und Gen von Interesse (GOI) enthält, ohne Replikationsursprung (ORI) und Selektionsmarker (selMark). Minicircle-DNA wird in Bakterien durch In-vivo-Rekombination hergestellt, um zusätzliche Sequenzen (sogenannte Mini-Plasmide) aus der Plasmid-DNA zu entfernen. Aufgrund ihrer Sicherheit hat Minicircle-DNA als nicht-viraler Vektor für Gentherapie, DNA-Impfstoffe usw. an Popularität gewonnen.
Abbildung 1. Struktur von Plasmid-DNA (pDNA) und Minicircle-DNA (mcDNA)
Minicircle-DNA-Rekombinationssysteme
Es wurden vier Haupt-Minicircle-DNA-In-vivo-Rekombinationssysteme untersucht, darunter Phagen-λ-Integrase, Phagen-P1-Cre-Rekombinase, ParA-Resolvase und PhiC31-Integrase/I-SceI.
|
Strategie
|
Phagen-λ-Integrase
|
Cre-Rekombinase des Phagen P1
|
ParA-Resolvase
|
PhiC31 integra se/I-SceI
|
|
Mechanismus
|
Tyrosin-Rekombinase, die über die Proteine FIS und IHF die Rekombination von att-Hybridstellen katalysiert
|
Ortsspezifische Tyrosin-Rekombinase, die bei der Bindung an loxP-Stellen eine bidirektionale Rekombination durchführt
|
Serin-Rekombinase, die eine irreversible und unidirektionale Rekombination zwischen zwei identischen MRS-Stellen durchführt
|
Serin-Rekombinase, die die unidirektionale Rekombination zwischen attP/attB-Bindungsstellen vermittelt, während I-SceI-Endonuklease die produktbezogenen Verunreinigungen und nicht rekombiniertes Elternplasmid spaltet
|
|
Eigenschaften
|
Abhängig von der Expression der Wirtsfaktoren FIS und IHF; intrinsische Toxizität; Verbleibendes Elternplasmid und Miniplasmid
|
Verbleibendes Elternplasmid und Miniplasmid
|
Hohe Ausbeute; Verbleibendes Elternplasmid und Miniplasmid
|
Der Abbau des Elternplasmids führte zu einer verringerten Ausbeute
|
Yaohai Bio-Pharma bietet CDMO-Lösung aus einer Hand für Minicircle-DNA
Referenz:
[1] Almeida AM, Queiroz JA, Sousa F, Sousa Â. Minicircle-DNA: Die Zukunft für DNA-basierte Vektoren? Trends Biotechnologie. 2020 Okt.;38(10):1047-1051. doi: 10.1016/j.tibtech.2020.04.008.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NEIN
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
