Schlüsselenzyme für die Produktion langer RNA
mRNA, eine Art langcodierende RNA, hat sich während COVID-19 bei einem größeren Personenkreis sicher und effizient bewährt. Andere langcodierende RNAs, wie selbstamplifizierende RNA (saRNA) und zirkuläre mRNA (circRNA), zeigten in präklinischen und klinischen Studien ebenfalls Wirksamkeit.
Die Produktion von langcodierender RNA im großen Maßstab beruht auf In-vitro-Transkription (IVT) durch mehrere enzymatische Reaktionen. Die Schritte der RNA-Produktion umfassen die Vorbereitung der DNA-Vorlage, die IVT-RNA-Synthese, die Zirkulation, die DNA-Entfernung, die RNA-Modifizierung (Capping und Tailing) und die RNA-Reinigung.
Es gibt mehrere Schlüsselenzyme, die bei der Produktion langer codierender RNA (z. B. mRNA, saRNA und circRNA) verwendet werden, darunter Restriktionsendonukleasen, T7-RNA-Polymerase (T7-RNAP), RNase-Inhibitor, anorganische Pyrophosphatase, DNase I, Vaccinia-Capping-Enzym und RNase R.
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Prozess
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Enzym
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Funktion
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DNA-Vorlagenpräparation
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Restriktionsendonukleasen
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Linearisierung der Plasmid-DNA (pDNA), um die Entstehung längerer Transkripte zu vermeiden.
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IVT-RNA-Synthese
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T7-RNA-Polymerase (T7-RNAP)
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Binden Sie an den T7-Promoter und erzeugen Sie ein spezifisches RNA-Transkript; spielen Sie eine Schlüsselrolle während der IVT-Reaktion.
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RNase-Inhibitor, rekombinant
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Hemmt die RNase-Aktivität während der IVT-Reaktion.
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Anorganische Pyrophosphatase (iPPase)
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Vermeiden Sie Pyrophosphat während der IVT-Reaktion.
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DNA-Entfernung
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DNase I
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Entfernen Sie die DNA-Vorlage.
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RNA-Modifikation
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Vaccinia-Capping-Enzym
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Fügen Sie den 1'-Enden der IVT-mRNA Cap5-Strukturen hinzu.
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2'-O-Methyltransferas
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| circRNA-Anreicherung |
RNase R |
Verdauen Sie lineare RNA und reichern Sie zirkuläre RNA an. |
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