Enzymatisches Reagenz

Modalität

Tag-Entfernungs-Proteasen

Um die Löslichkeit zu verbessern und den Reinigungsprozess rekombinanter Proteine zu vereinfachen, fügen Forscher normalerweise Fusionsmarker hinzu, von denen häufig His-Tag, Maltose-bindendes Protein (MBP) und Glutathion-S-Transferase (GST) verwendet werden.

Obwohl es als zusätzliche Proteinsequenz markiert ist, sollte es entfernt werden, um die biologische Aktivität in der Pharmaindustrie aufrechtzuerhalten. Die Entfernung von Fusionsmarkierungen erfordert ortsspezifische Proteasen wie Enterokinase (EK), Thrombin, Tabakätzvirus-Protease (TEVp), humane Rhinovirus-Protease 3C (HRV3C), kleine Ubiquitin-modifizierende Protein-Protease (SUMO), Tabakvenenfleckenvirus-Protease (TVMV) und Carboxypeptidase A/B (CPA/CPB).

Typ	Enzym	Anerkennungsseite
Endoproteasen zur Markierungsentfernung	Enterokinase (EK), Enteropeptidase	DDDDK↓
	Thrombin	LVPR↓GS
	TEV-Protease	ENLYFQ↓G
	HRV3C-Protease	LEVLFQ↓GP
	SUMO-Protease	SUMO-Tertiärstruktur
	TVMV-Protease	ETVRFQG↓S
Exoproteasen zur Markierungsentfernung	Carboxypeptidase A (CPA)	C-terminale Aminosäuren, außer Pro, Lys und Arg
Exoproteasen zur Markierungsentfernung	Carboxypeptidase B (CPB)	C-terminales Lys und Arg

Andere Proteasen

Anwendung	Enzym	Funktion
Andere Proteasen	Protease K	Eine Serinprotease, die Proteine durch Hydrolyse von Peptidbindungen verdaut.
	IdeS, IgG-Protease	IgG-abbauende Enzyme (Ides), die an einer bestimmten Stelle von Immunglobulin G (IgG) spalten und dabei Fab- und Fc-Fragmente erzeugen
	IgA1-Protease	Ein proteolytisches Enzym, das eine spezifische Stelle in der Scharnierregionsequenz des menschlichen Immunglobulins A1 (IgA1) spaltet.

Nuklease

Anwendung	Enzym	Funktion
Nuklease	Nuklease	Spaltt Nukleinsäuren (DNA oder RNA) durch Hydrolyse der Phosphodiesterbindungen.
Nuklease	Enzym einschränken	Eine Endonuklease, die DNA an oder in der Nähe bestimmter Stellen spaltet.

Amidase

Anwendung	Enzym	Funktion
Amidase	PNGase F	Spaltt zwischen den innersten GlcNAc- und Asparaginresten von mannosereichen, hybriden und komplexen Oligosacchariden.

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