Enzymatischer Reagenz

Modalität

Tag-Entfernung-Proteasen

Um die Löslichkeit und den Reinigungsprozess von rekombinanten Proteinen zu verbessern, fügen Forscher normalerweise Fusions-Tags hinzu, wobei His-Tag, Maltoz-bindendes Protein (MBP) und Glutathion-S-Transferase (GST) häufig verwendet werden.

Da der Tag als zusätzliche Aminosäuresequenz hinzugefügt wird, muss er im Pharmabereich entfernt werden, um die biologische Aktivität beizubehalten. Die Entfernung der Fusions-Tags erfordert ortsspezifische Proteasen, wie Enterokinase (EK), Thrombin, Tabak-Etch-Virus-Protease (TEVp), menschliches Rhinovirus-Protease 3C (HRV3C), kleines ubiquitin-modifizierendes Protein (SUMO)-Protease, Tabak-Ader-Mosaik-Virus (TVMV)-Protease und Carboxypeptidase A/B (CPA/CPB).

TYP	Enzym	Erkennungsstelle
Tag-Entfernung-Endoproteasen	Enterokinase (EK), Enteropeptidase	DDDDK↓
	Thrombin	LVPR↓GS
	TEV-Protease	ENLYFQ↓G
	HRV3C-Protease	LEVLFQ↓GP
	SUMO-Protease	SUMO-Tertiärstruktur
	TVMV Protease	ETVRFQG↓S
Tag-Entfernung-Exoproteasen	Carboxypeptidase A (CPA)	C-terminal Aminosäuren, außer Pro, Lys und Arg
Tag-Entfernung-Exoproteasen	Carboxypeptidase B (CPB)	C-terminal Lys und Arg

Andere Proteasen

Anwendung	Enzym	Funktion
Andere Proteasen	Protease K	Eine Serinprotease, die Proteine durch Hydrolyse von Peptidbindungen verstoffwechselt.
	IdeS, IgG-Protease	IgG-abbauschende Enzyme (Ides), die an einer spezifischen Stelle des Immunoglobulins G (IgG) schneiden und Fab- und Fc-Fragmente erzeugen
	IgA1-Protease	Ein proteolytisches Enzym, das eine bestimmte Stelle in der Scharnierbereichssequenz des menschlichen Immunoglobulins A1 (IgA1) spaltet.

Nuklease

Anwendung	Enzym	Funktion
Nuklease	Nuklease	Schneidet Nukleinsäuren (DNA oder RNA) durch Hydrolyse der Phosphodiesterbindungen.
Nuklease	Restriktionsenzyme	Eine Endonuklease, die DNA an oder in der Nähe spezifischer Stellen abschneidet.

Amidase

Anwendung	Enzym	Funktion
Amidase	PNGase F	Spaltet zwischen dem innersten GlcNAc und den Asparaginresten von hochmannosigen, hybriden und komplexen Oligosacchariden.

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