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原材料および試薬
再構成タンパク質の可溶性を向上させ、精製プロセスを簡略化するために、研究者たちは通常、ヒスチジン・タグ(His-tag)、マルトース結合タンパク質(MBP)、グルタチオン-S-トランスフェラーゼ(GST)など、融合タグを付加します。
しかし、薬品産業において生物活性を維持するためには、この追加されたタンパク質配列のタグを除去する必要があります。融合タグの除去には、サイト特異的プロテアーゼが必要で、エントロキナーゼ(EK)、トロンビン、タバコ刻み病ウイルスプロテアーゼ(TEVp)、ヒトノーズウイルスプロテアーゼ3C(HRV3C)、小さなユビキチン様修飾タンパク質(SUMO)プロテアーゼ、タバコ静脈モザイクウイルス(TVMV)プロテアーゼ、カルボキシペプチダーゼA/B(CPA/CPB)などが使用されます。
タイプ |
酵素 |
認識部位 |
タグ除去エンドプロテアーゼ |
エンテロキナーゼ (EK), エンテロペプチダーゼ |
DDDDK↓ |
トロンビン |
LVPR↓GS |
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TEVプロテアーゼ |
ENLYFQ↓G |
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HRV3Cプロテアーゼ |
LEVLFQ↓GP |
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SUMOプロテアーゼ |
SUMO三次構造 |
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TVMVプロテアーゼ |
ETVRFQG↓S |
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タグ除去エクソプロテアーゼ |
カルボキシペプチダーゼA (CPA) |
C末端アミノ酸(Pro、Lys、Argを除く) |
カルボキシペプチダーゼB (CPB) |
C末端のLysおよびArg |
適用 |
酵素 |
機能 |
その他のプロテアーゼ |
プロテアーゼK |
ペプチド結合を加水分解することによりタンパク質を分解するセリンプロテアーゼ。 |
イデス、IgGプロテアーゼ |
免疫グロブリンG(IgG)の特定部位で切断し、FabおよびFcフラグメントを生成するIgG分解酵素(Ides) |
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IgA1プロテアーゼ |
ヒト免疫グロブリンA1 (IgA1) ヒンジ領域配列の特定部位を分解するプロテオリティックエンザイム。 |
適用 |
酵素 |
機能 |
ヌクレアーゼ |
ヌクレアーゼ |
リン酸二酯結合を加水分解することにより、核酸(DNAまたはRNA)を切断する。 |
制限酵素 |
特定のサイト付近でDNAを切断するエンドヌクレアーゼ。 |
適用 |
酵素 |
機能 |
アミダーゼ |
PNGase F |
高マンノース型、ハイブリッド型、複合型オリゴ糖の内側のGlcNAcとアスパラギン残基の間を切断する。 |