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カスタム saRNA 合成

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IVT RNA

カスタム saRNA 合成

自己増幅 mRNA (saRNA) はレプリコン RNA とも呼ばれ、アルファウイルスまたはフラビウイルス由来の in vitro 転写 (IVT) mRNA 配列とウイルスレプリカーゼ遺伝子をコードします。ウイルスレプリカーゼ遺伝子は mRNA の自己増幅を可能にし、その結果、増幅しない mRNA と比較してタンパク質発現が増加し、RNA の必要量が最小限になります。もう 14 つの特徴は、saRNA が比較的大きな分子 (XNUMX kb 以上) であることです。

Yaohai Bio-Pharmaは、配列設計と最適化、IVT、精製、凍結乾燥、脂質ナノ粒子（LNP）カプセル化など、非増幅mRNAと自己増幅mRNA（1000 nt〜14000 nt）を提供するための一連のmRNA合成技術を確立しました。すべての製品は、厳格な品質管理基準の下でリリースされます。

図 1 IVT mRNA の構造的特徴: 従来型、環状、自己増幅型 mRNA。

自己増幅mRNAの配列特徴

自己増幅RNAは、アルファウイルスであるベネズエラ馬脳炎ウイルス（VEEV）に由来する1つの非構造タンパク質（nsP2、nsP3、nsP4、nsP1と指定）で構成されています。これらのうち、nsP7はGTaseとN2MTaseという0つの酵素活性を示し、nsP2はIVT mRNAをキャップしてCap 3構造を生成するために極めて重要なRTPase活性を持っています。さらに、nsPXNUMXはプロテアーゼとヘリカーゼとして機能し、nsP複合体全体の複雑な処理を促進します。nsPXNUMXの正確な機能は依然として不明ですが、多様な宿主細胞タンパク質と相互作用し、宿主による抗ウイルス反応の減衰に寄与しています。

アルファウイルスのサブゲノムプロモーター (SGP) 領域は、目的遺伝子 (GOI) の前にあります。SGP 要素は、ウイルスの nsP タンパク質をコードする配列の読み取りをバイパスすることで、GOI 転写の開始を促進します。 

図2 Yaohai Bio-Pharma RNASci プラットフォームの eGFP saRNA の合成と細胞アッセイ。 

saRNAのカスタムソリューション

saRNA の合成プロトコルは mRNA と似ています。 カスタム mRNA 合成

  • シーケンス設計
  • プラスミドテンプレートの調製
  • インビトロ転写（IVT）
  • mRNA 酵素キャッピング
  • mRNA 共転写キャッピング
  • mRNAの精製
  • mRNAの凍結乾燥
  • LNP カプセル化
  • 分析とテスト

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