細胞ベースの効力アッセイ
mRNA効力アッセイの重要性
mRNA ワクチンと治療薬の急速な開発に伴い、mRNA の翻訳効率を含む効力 (生物活性の定義) をテストするには、特定の一連の分析方法が必要です。これらの方法は通常、細胞トランスフェクションと標的タンパク質の機能アッセイに基づいています。
Yaohai Bio-Pharma は、細胞トランスフェクション (293T、HepG2、HeLa、K562、U937、Raw264.7 細胞など) および ELISA またはウェスタンブロッティング (WB) アッセイを含む、mRNA 原薬または LNP 製品の細胞ベースの力価アッセイを提供しています。
力価アッセイの規制要件
WHO の規制上の考慮事項によると、「最終ワクチンの各ロットの効力は、適切に定量的で検証された機能的方法を使用して決定されるべきです。潜在的な in vitro 効力アッセイには、細胞ベースのトランスフェクション システムまたは無細胞アッセイが含まれる可能性があります。」そしてUSPは、mRNAの効力、つまり標的タンパク質の発現を試験するために「細胞ベースのアッセイ」を推奨した。
分析方法
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分析
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メソッド
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効力アッセイ
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細胞ベースのトランスフェクションと標的タンパク質の同定:
293T、HepG2、HeLa、K562、U937、Raw264.7 細胞など
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手順
ステップ 1. mRNA または mRNA-LNP による細胞ベースのトランスフェクション
細胞を培養し、mRNA または mRNA-LNP をトランスフェクトします。具体的には、mRNAはトランスフェクション試薬と混合した後にトランスフェクトされますが、mRNA-LNPは細胞に直接トランスフェクトされます。 24 ～ 48 時間後、発現したタンパク質を含む上清を遠心分離により清澄します。
ステップ 2. 標的タンパク質の機能アッセイ
ELISA または WB アッセイを実行して、標的タンパク質の機能的結合を評価します。
ケーススタディ
mRNAサンプルの細胞ベースの効力アッセイ
Yaohai-BioPharma は、細胞培養、細胞トランスフェクション、タンパク質機能アッセイを含む、細胞ベースの mRNA 効力アッセイ法を開発しました。 eGFP mRNA、mCherry mRNA、ルシフェラーゼ mRNA、スパイクタンパク質 mRNA を 293T 細胞にトランスフェクトし、蛍光、発光または着色シグナル、WB、ELISA を通じて標的タンパク質を検出しました。
Yaohai Bio-Pharma による mRNA 製品の細胞ベースの効力アッセイ
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