CircRNA の調製には、環化のための前駆物質 (RNA 前駆物質) として線状 RNA が必要です。RNA 前駆物質は通常、線状化プラスミド DNA を転写テンプレートとして使用して調製され、T7 RNA ポリメラーゼの助けを借りて in vitro で転写されます。
高品質のプラスミド DNA は、in vitro 転写 (IVT) に不可欠です。成熟したプラスミド調製サービス プラットフォームに基づいて、Yaohai Bio-Pharma は、IVT 製品の完全性を保証するために、高純度で標準の線形化プラスミド DNA (pDNA) 調製サービスを提供できます。
プロセス | オプションサービス | サービスの詳細 | 配達期間(平日) |
環状プラスミドの調製 | 遺伝子合成 | 遺伝子合成(サードパーティ) | 7-10 |
プラスミド増幅 | プラスミド増幅 | 2 | |
プラスミド抽出 | |||
線状化プラスミド調製 | プラスミドの線状化と精製 | プラスミドの線状化 | 1 |
線形化DNA精製 | |||
プラスミドDNAの品質管理 | 濃度純度 | 紫外線(UV)分光光度計 | 1-2 |
プラスミドの立体構造 | アガロースゲル電気泳動(AGE) | ||
キャピラリー電気泳動(CE) - オプション | |||
プラスミドの識別 | 制限酵素の同定/AGE |
線形化方法の柔軟な選択
高い回収率を達成するための DNA 抽出および精製方法の最適化。
厳格なプロセス管理基準、研究用プラスミドサンプルのスーパーヘリカル構造形成率は 80% 以上。
実験ニーズを満たす高水準かつ高効率のプラスミド調製および品質管理サービス。
Yaohai Bio-Pharmaの製品であるmCherry circRNAを例にとると、転写テンプレートプラスミドサンプル(研究グレード)のスーパーコイル化率は70%を超え、直線化率は100%に近づいています。
mCherry circRNA は、直線化されたプラスミドをテンプレートとして調製され、293T 細胞にトランスフェクトされます。トランスフェクションの 24 時間後には高いレベルの蛍光発現 (赤色蛍光) が検出され、48 時間後にはさらに増加し、トランスフェクションの 7 日目と 14 日目にも検出されます。
mCherry タンパク質は安定的かつ効率的に発現され、転写テンプレートの純度は高品質の circRNA 医薬品 (DP) の要件を満たすことができます。
mCherry circRNAのin vitro発現検証