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インビトロ転写と循環

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IVT RNA

インビトロ転写と循環

RNA 前駆体のバッチ調製に関しては、一般的に使用されている方法は in vitro 転写 (IVT) です。IVT 反応では、T7 プロモーターを含む線状化プラスミド DNA をテンプレートとして使用し、T7 RNA ポリメラーゼの存在下でヌクレオシド三リン酸 (NTP) を基質として RNA 前駆体を合成します。

インビトロ環化法には、化学ライゲーション、酵素ライゲーション、およびイントロン-エクソン置換 (PIE) 法が含まれます。化学ライゲーションと酵素ライゲーションは、短い RNA の環化に適しています。断片が 100 nt より大きい場合、環化率は大幅に低下します。対照的に、PIE システムに基づくヌクレアーゼ法では、8 kb 配列の環化を実現できます。

グアノシン三リン酸（GTP）の触媒作用により、PIE構造はイントロン外配列の環化を受けます。環化率を高めるための合理的な戦略と組み合わせることで、Yaohai Bio-Pharmaは最大4kbの配列の環化を達成し、環化効率は80%を超えます。

未定義

RNA の in vitro 環化反応は次のように進行します。

RNA 前駆体は in vitro 転写によって合成され、PIE 成分は GTP の触媒下で自己スプライシングを完了して circRNA を形成します。

未定義

サービス詳細
プロセス サービスの詳細 配達期間（平日）
試験管内転写と循環 反応システムの確認 1-2
試験管内転写および環化反応
RNase R消化
反応の最適化 反応組成、時間の最適化 2-5
私たちの特徴
    • 厳格なテスト設計と最適化

最大 4 kb の RNA 環化を実現できます。

    • 高い環化効率

合理的なシーケンス最適化戦略により、80% を超える環化率を達成できます。

    • RNaseの厳格な管理

実験環境および消耗品における RNase の厳格な管理により、RNA の劣化が効果的に防止されます。

ケーススタディ

circRNAのin vitro環化と濃縮

Yaohai Bio-PharmaはPIEシステムに基づいてcircRNAの配列を最適化し、アガロースゲル電気泳動（AGE）による環化率は80％を超えています。RNase Rを使用してcircRNAを濃縮し、Eゲル電気泳動の結果、線状RNA前駆体が消化され、さらに精製すると、切断されたcircRNAの大部分を除去できることが示されました。精製ソリューションは、Yaohai Bio-Pharmaが独自に開発したものです。

未定義

試験管内循環とcircRNAの濃縮

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