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体外転写および円形化

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IVT RNA

体外転写および円形化

RNA前駆体のバッチ製造に関して、一般的に使用される方法は体外転写（IVT）です。IVT反応では、T7プロモーターを含む線状化されたプラスミドDNAをテンプレートとし、T7 RNAポリメラーゼの存在下でヌクレオシド三リン酸（NTPs）を基質としてRNA前駆体を合成します。

体外でのサイクリゼーション法には化学的結合、酵素的結合、および順不同イントロン-エキソン（PIE）法があります。化学的結合と酵素的結合は短いRNAのサイクリゼーションに適しています。断片が100 ntを超える場合、サイクリゼーション効率は大幅に低下します。一方で、PIEシステムに基づく核酸分解酵素法では8 kbの配列のサイクリゼーションを達成できます。

グアノシン三リン酸 (GTP) の触媒作用の下で、PIE構造はエキストラインtron配列のサイクリゼーションを経ます。合理的な戦略を用いてサイクリゼーション速度を向上させることで、Yaohai Bio-Pharma は最大4 kbの配列のサイクリゼーションを実現し、その効率は80%以上に達します。

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RNAの体外サイクリゼーション反応は以下の通りです：

RNA前駆体は体外転写によって合成され、GTPの触媒作用の下でPIE成分が自己スプライシングを完了し、circRNAを形成します。

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サービスの詳細
プロセス サービス詳細 納期（営業日）
体外転写および円形化 反応系確認 1-2
体外転写とサイクル化反応
RNase R消化
反応最適化 反応組成、時間の最適化 2-5
私たちの特徴
    • 厳密なテスト設計と最適化

最大4 kbのRNAサイクリゼーションが達成可能です。

    • 高いサイクリゼーション効率

合理的な配列最適化戦略により、80%以上のサイクリゼーション率が達成できます。

    • RNaseの厳格な管理

実験環境や消耗品におけるRNaseの厳格な管理により、RNAの劣化は効果的に防止されます。

ケーススタディ

CircRNAの体外サイクリゼーションとエンリッチメント

PIEシステムに基づき、姚海バイオファーマはcircRNAの配列を最適化し、アガロースゲル電気泳動（AGE）によって80%以上のサイクリゼーション率を達成しました。RNase Rを使用してcircRNAをエンリッチすると、E-ゲル電気泳動の結果から、線状RNA前駆体が分解され、さらに精製することで、ほとんどの切れ目のあるcircRNAが除去されます。精製溶液は姚海バイオファーマ独自開発のものです。

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CircRNAの体外循環とエンリッチメント

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