Rekombinantni encim

Modaliteta

Rekombinantni encimi

Rekombinantni encim za terapevtsko uporabo

Terapevtski encimi, pridobljeni z biotehnološkimi postopki, se pogosto uporabljajo za več kliničnih aplikacij, vključno z encimsko nadomestno terapijo, razgradnjo nakopičenih metabolitov in toksinov, zdravljenje raka in urejanje genoma. V mikrobnem ekspresijskem sistemu je mogoče proizvesti več terapevtskih encimov.

uporaba	Encimi	Snov	Tipični izdelki/cevovodi
Encimsko nadomestno zdravljenje	Adenozin deaminaza, ADA	Adenozin ali deoksiadenozin	Elapegademase-lvlr (Revcovi)
Encimsko nadomestno zdravljenje	Fenilalanin amoniak liaza, PAL	Fenilalanin	Pegvaliase-pqpz (Palynziq)
Razgradnja nakopičenih metabolitov	Uricaza/urat oksidaza	Sečna kislina	Pegltikaza (Krystexxa) Rasburikaza (Fasturtec)
	Kolagenaza	kolagenska "brazgotina"	Collagenase clostridium histolyticum (Xiaflex, Qwo, Santyl)
	Okrnjeni plazmin	Kolagen, fibronektin in laminin	Okriplazmin (Jetrea)
	Aktivator okrnjenega tkivnega plazminogena (tPA)	plazminogen	Reteplaza (Retavaza)
	IgG proteaza	Imunoglobulin G (IgG)	Imlifidaza (Idefrix)
	IgA proteaza	Imunoglobulin A (IgA)	PKU308/AP308IGAN IgA proteaza
Razgradnja toksinov	Karboksipeptidaza G2	Metotreksat	Glukarpidaza (voraksaz)
Zdravljenje raka	Encim, specifičen za asparagin	asparagin	Asparaginaza (Elspar) Calaspargase pegol-mknl (Asparlas)
Urejanje genoma	Cas9 nukleaza	Ciljni gen	Exagamglogene autotemcel (Exa-cel, CTX001)

Rekombinantni encim kot material

Obstaja več encimov, ki se uporabljajo pri proizvodnji dolgo kodirajoče RNA (npr. mRNA, saRNA, circRNA), proizvodnji konjugatov protitelesa in zdravila (ADC) in drugih. Mikrobno proizvedeni encimi so stroškovno učinkovitejši od celic sesalcev, zlasti ekspresijskega sistema E. coli.

uporaba	Encimi	funkcija
Encimi za proizvodnjo linearne RNK, brez RNaze	Restrikcijske endonukleaze	Linearizacija plazmidne DNA (pDNA), da se prepreči generiranje daljšega zapisa.
	T7 RNA polimeraza (T7 RNAP)	Vežejo se na promotor T7 in ustvarijo specifičen zapis RNA; Igrajo ključno vlogo med reakcijo prepisa in vitro (IVT).
	Encim za zapiranje vakcinije	Dodajte strukture Cap na 5' konce IVT mRNA.
	Pirofosfataza, anorganska (iPPaza)	Preprečite pirofosfat med reakcijo IVT.
	Zaviralec RNaze, rekombinantni	Zavira aktivnost RNaze med reakcijo IVT.
	DNaza I	Odstranite predlogo DNK.
Encim za proizvodnjo circRNA, brez RNaze	RNaza R	Prebavi linearno RNA in obogati krožno RNA.
Encimsko posredovana glikanska konjugacija	Peptid-N-glikozidaza (PNGase F)	Cepi amidno vez med prvim saharidom GlcNAc in stransko verigo Asn297 L; Sprostite glikane iz protiteles IgG.
	Bakterijska transglutaminaza (BTG)	Konjugirajte koristne obremenitve posebej za ustvarjanje ADC-jev.
	Sortase A	Katalizira ligacijo proteinov.
	β1,4-galaktozidaza	Sprosti vse končne galaktoze in tvori homogeno izoobliko protitelesa G0.
	β1,4-galaktoziltransferaza (Gal-T)	Prenesite ostanek sladkorja s kemično reaktivno funkcionalno skupino.
	α2,6-sialiltransferaza (Sial T)	Vključite končne ostanke sialne kisline v naravno glikansko strukturo protitelesa.
Encimsko posredovano preoblikovanje glikana in glikoinženiring	Endo-N-acetilglukozaminidaza (ENGase)	Hidrolizira β1,4-glikozidno vez med GlcNAcβ1–4GlcNAc N-glikanov; Odstranite N-povezane glikane na Fc regiji protiteles IgG.
	Endoglikozidaza S (EndoS)
	Glikoziltransferaze (GT)	Prenesite N-glikan oksazolin v defukozilirane IgG.
drugi	Encimi, ki jih proizvaja mikrobni sev	Potreba po meri

Rekombinantni encim kot reagent

Proteaze za odstranjevanje oznak

Fuzijske oznake se pogosto uporabljajo za izboljšanje topnosti in stabilnosti zanimivih rekombinantnih proteinov in olajšanje njihovega čiščenja. Pogosto uporabljene oznake vključujejo His-tag, protein, ki veže maltozo (MBP), glutation-s-transferazo (GST) itd.

Običajno se povezovalno zaporedje doda med fuzijsko oznako in sekvenco ciljnega proteina, da se oznaka odstrani. Za odstranitev fuzijskih oznak so potrebne proteaze, specifične za mesto, kot so enterokinaza (EK), trombin, proteaza virusa jedkanja tobaka (TEVp), proteaza 3C človeškega rinovirusa (HRV3C), proteaza majhnega ubikvitin modificirajočega proteina (SUMO), virus pegavosti tobačnih žil ( TVMV) proteazo in karboksipeptidazo A/B (CPA/CPB).

tip	Encimi	Prepoznavno mesto
Endoproteaze za odstranjevanje oznak	Enterokinaza (EK), enteropeptidaza	DDDDK↓
	trombin	LVPR↓GS
	TEV proteaza	ENLYFQ↓G
	HRV3C proteaza	LEVLFQ↓GP
	SUMO proteaza	SUMO terciarna struktura
	TVMV proteaza	ETVRFQG↓S
Eksoproteaze za odstranjevanje oznak	karboksipeptidaza A (CPA)	C-terminalne aminokisline, razen Pro, Lys in Arg
Eksoproteaze za odstranjevanje oznak	Karboksipeptidaza B (CPB)	C-terminalni Lys in Arg

Druge proteaze, nukleaze in amidaze

uporaba	Encimi	funkcija
Druge proteaze	Proteaza K	Serinska proteaza, ki prebavlja beljakovine s hidrolizacijo peptidnih vezi.
	IdeS, IgG proteaza	Encimi za razgradnjo IgG (Ides), ki cepijo na specifičnem mestu imunoglobulina G (IgG), pri čemer nastanejo fragmenti Fab in Fc
	IgA1 proteaza	Proteolitični encim, ki cepi specifično mesto v zaporedju tečajne regije humanega imunoglobulina A1 (IgA1).
Nukleaza	Nukleaza	Cepi nukleinske kisline (DNK ali RNK) s hidrolizacijo fosfodiestrskih vezi.
Nukleaza	Omejite encim	Endonukleaza, ki cepi DNA na določenih mestih ali blizu njih.
Amidaza	PNGase F	Cepi med najbolj notranjimi ostanki N-acetilglukozamina (GlcNAc) in asparagina visoko manoznih, hibridnih in kompleksnih oligosaharidov.

Yaohai Bio-Pharma ponuja rešitev CDMO na enem mestu za rekombinantne encime

Sklic:

[1] Hennigan JN, Lynch MD. Preteklost, sedanjost in prihodnost encimskih terapij. Drug Discov danes. 2022 Jan;27(1):117-133. doi: 10.1016/j.drudis.2021.09.004.

Vse kategorije

Modaliteta