In vitro sinteza mRNA
Glavni sestavniki mRNA so 5'-cap, 5'-UTR, odprti berljivi okvir (ORF), 3'-UTR in 5' poli A rep, ki so pomembni za ohranjanje funkcije mRNA. Raziskovalci so uporabili različne metode za identifikacijo in optimizacijo zaporedij in struktur mRNA.
Sinteza mRNA se izvaja na osnovi in vitro transkripcije (IVT) z uporabo linearnih DNA šablón, RNA polymeraz (T3, T7 ali SP6), neizmenjenih ali izmenjenih nukleotidov, enzimov in ustreznih sredstev.
modifikacija 5' cap
Sekvence zrelega mRNA iz eukariotske celice prikazujejo 7-metilguanozinsko (m7G) kapico na 5' koncu, ki poveča stabilnost mRNA in učinkovitost prevoda. Obstajata dva splošna načina za hvat mRNA v vitro. Prvič, mRNA se lahko zakapiči skupaj s transkriptom v vitro tako, da se v sistem IVT doda kap analog m7GpppG strukture (npr. CleanCap). Ta metod zakapičevanja med transkricijo omogoča naravno 5' kapslano strukturo in poveča učinkovitost zakapičevanja skoraj do 90-99%. Drugič, kartiranje mRNA je tudi mogoče izvesti s kartirnimi enzimskimi reakcijami po transkripciji v vitro.
Polia Modifikacija
Poly(A) rep vsebuje tudi podaljšanje polovne življenjske dobe mRNA v vivo in poveča učinkovitost prevoda mRNA. Dłina posplošene poly(A) repa bi morala biti 100-300 nukleotidov. Prilagojen adenosin povečuje stabilnost poly A repa pred razgradnjo s celinsko RNase. Poly A rep se lahko vstavi z transkripcijo in vitro, uporabljajoči DNA šablono, ki kodira poly A, kar pomeni določeno dolžino zaporedja poly A. Lahko se uporabi tudi rekombinantna poly A polymeraza z enzimatsko poliadenilacijo po transkripciji mRNA.
Modifikacija nukleotidov
Spremenjeni nukleozidi lahko inhibirajo prepoznavo in/ali aktivacijo receptorjev za prepoznavo vzorcev (PRR) ter povečajo učinkovitost mRNA cepiv v dveh povsem različnih načinh. Dodatek določenih kemikalno spremenjenih nukleozidov, vključno z pseudouridino (ψ), 1-metilpseudouridino (m1ψ), tiouridino (s4U) in 5-metilcitozinom (m5C), lahko prepreči aktivacijo TLR7/8 in drugih receptorjev vrodnega imunskega sistema, kar znatno zmanjša imunogenost mRNA.
sistem za dostavo mRNA
Da bi ohranila funkcijo, mora mRNA vstopiti v citozol gostitelja in izraziti določene antigene. Eden od najtežjih izzivov pri mRNA cepilih in terapijah leži v dostavi mRNA v ciljne celice z dovolj visokimi stopnjami prevajanja, kar zahteva zelo specifične in učinkovite sisteme za dostavo mRNA. Bilo je razvitih in uporabljenih več sistemov za dostavo mRNA, vključno s dendritičnimi celicami (DCs), protaminom, kationskimi polimeri in kationskimi liposomi.
Kompleksi kationičnih lipidov z mRNA in drugimi pripravki lahko skupaj oblikujejo 80-200 nm velikih nanoclivic, imenovanih lipidne nanoclivice (LNP). Kot ena najnaprednejših sistemov za dostavo mRNA vsebuje LNP ionizabilne kationične lipide, naravne fosfolipide, kolesterol in polietilen glikol (PEG). Več RNA cepiv in terapij (siRNA in mRNA), ki so jih odobrila Združena agencija za droge ZDA, temelji na sistemih za dostavo LNP.
Yaohai Bio-Pharma Ponudi Kompleksno Rešitev za RNA
Prilagojeni Rezultati
|
Razred
|
Rezultati
|
Specificacija
|
Aplikacije
|
|
ne-GMP
|
Farmacevtska Snov, mRNA
|
0,1~10 mg (mRNA)
|
Predklinična raziskovanja, kot so transfekcija celic, razvoj analitičnih metod, predstabilnostne študije, razvoj formulacij
|
|
Zdravilo, LNP-mRNA
|
|
GMP, Sterilnost
|
Farmacevtska Snov, mRNA
|
10 mg~70 g
|
Izkaz o poskusnem zdravilu (IND), Avtorizacija kliničnih poskusov (CTA), Ponujanje za klinične poskuse, Zahteva za dovoljenje za biološka zdravila (BLA), Trgovinski ponujalnik
|
|
Zdravilo, LNP-mRNA
|
5000 ampul ali predpolnjenih špajev/ kartusov
|
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
