Krožni mRNA (circRNA) se široko uporablja pri študijih funkcij genov ali proteínov. Hkrati je priljubljen tudi v razvoju preventivnih in terapevtskih biologičnih sredstev, podobno kot mRNA.
Yaohai Bio-Pharma je vzpostavila skupino tehnologij za sintezo circRNA, da zagotovi visokokakovostne RNA, kot so načrtovanje in optimizacija zaporedij, transkripcija v testu (IVT), kroženje, očiščevanje in zapolnitev z lipidnimi nanocelicami (LNP). Vse produkte izdajamo pod strogi standardi kakovostnega nadzora (QC).
V primerjavi s linearno mRNA je krožna RNA (circRNA) strukturno bolj stabilna in je glavni trenutni točkast v raziskovanju nukleinsko-kislinskih zdravil. Ima širok obseg uporabe v različnih področjih, bodisi kot kodirajoča circRNA ali nekodirajoča circRNA, vključno z preventivnimi cepi za okužne bolezni, terapevtskimi onkološkimi cepi, terapevtskimi onkološkimi zdravili, terapijo zamenjave proteina, regenerativno medicino, celulsko in genetsko terapijo (CGT), vloga molekularnega spomina in RNA aptamer.
Proces | Izbirne storitve | Podrobnosti storitev | Dobavni rok (dan) |
načrtovanje in optimizacija zaporedja circRNA | Načrtovanje in optimizacija kodirnih zaporedij | Optimizacija kodonske CDS sekvence | 1 |
Dizajn in optimizacija nekodirujočih zaporedij | Intron in ekson zaporedja, homologična ravnovesja in načrtovanje in optimizacija presledkov | 1-2 | |
Priprava krožnih plazmidov | Sinteza gena | Sintetizacija genov (tretja stran) | 7-10 |
Amplifikacija plazmida | Amplifikacija plazmida | 2 | |
Ekstrakcija plazmida | |||
Priprava linearnega plazmida | Linearnizacija in očiščanje plazmidne DNA | Linearnizacija plazmida | 1 |
Očiščenje linearnega DNA-ja | |||
Transkripcija v testnu cevici in ciklizacija | Transkripcija v testnu cevici in ciklizacija | Reakcije transkripcije v testni cevici in ciklizacije | 1-2 |
Degradacija z RNase R | |||
Optimizacija - izbirno | Sestav reakcije, optimizacija časa | 2-5 | |
čiščenje circRNA | Konvencionalna metoda očiščevanja | Zasoljevanje z litijev kloridom | 1 |
Ciscenje z magnetnimi sferami | 1 | ||
Zelo čisto očiščevanje circRNA | Pripravno visoko učinkovito tekočinsko kromatografijo (HPLC) | 1-2 | |
Zamenjava buferja | Ultrafiltracija | 1 | |
likvidacije circRNA | Izpolnitev vzorca | Polnilo | 2-3 |
Liofilizacija | Predzamrzeljavanje | ||
Prva sušenja (sublimacija) | |||
Druga sušenja (dezorpcija) | |||
zaklepanje circRNA-LNP | Zapoljevanje v LNP | Predobdelava snovi in tekočine | 2 |
Mešanje s mikrofluidičnim napravljem | |||
Zamenjava buferja | Tangencialno točkovno filtriranje | 1 | |
Steriliziraj | Filtracija | ||
Kontrola kakovosti plazmidnega DNA | Koncentracija/purenost | Ultravijolična (UV) spektrofotometrija | 1-2 |
Plazmidna konformacija | Elektroforeza v agarosovem gelu (AGE) | ||
Kapilarna elektroforeza (CE) - izbirno | |||
Identifikacija plazmida | Identifikacija omejilnih enzimov/AGE | ||
Krmiljenje kakovosti circRNA | Koncentracija/purenost | Ultravijolična (UV) spektrofotometrija | - |
Čistota | Elektroforeza v agarovem gelu (AGE)/E-Gel | 0.5 | |
HPLC - izbirno | 1 | ||
Kontrola kakovosti circRNA-LNP | Učinkovitost inkapsulacije | RiboGreen metoda | 1 |
Velikost delcev | Dinamično razsevanje svetlobe (DLS) | 1 | |
Indeks polidispersnosti | Dinamično razsevanje svetlobe (DLS) | 1 | |
Zeta potencial | Dinamično razsevanje svetlobe (DLS) | 1 | |
Test moči na celični bazi | Celulna transfekcija | Postavljanje celic, transfekcija celic | 4 |
Zaznavanje ciljne proteine | Opazovanje fluorescenca, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Transfekirali smo okroglo RNA z izboljšano zeleno fluorescenčno beljakovo krožno RNA (eGFP circRNA), mČerveno circRNA, luciferazo circRNA v 293T celice in smo zaznali ciljno beljakastro prek fluorescenca, luminescenca ali barvne spremebe, western blot (WB), sorodnostni imunoenzimski test (ELISA).
Testi moči na celični bazi vzorcev circRNA po Yaohai Bio-Pharma