mRNA se pogosto uporablja pri preučevanju funkcij genov ali beljakovin. Medtem je pogost pri razvoju profilaktičnih in terapevtskih bioloških zdravil. Kot običajna strategija sinteze za molekule RNA nam in vitro transkripcija (IVT) omogoča učinkovito pridobivanje prilagojenih transkriptov.
Yaohai Bio-Pharma je vzpostavil nabor tehnologij za sintezo mRNA za zagotavljanje visokokakovostne RNA, kot so zasnova in optimizacija zaporedja, IVT, čiščenje, liofilizacija in inkapsulacija lipidnih nanodelcev (LNP). Vsi izdelki so izdani v skladu s strogimi standardi nadzora kakovosti (QC).
Z izbruhom pandemije COVID-19 leta 2020 je tehnologija mRNA skokovito napredovala, z njo povezane raziskave in aplikacije pa so se razvile brez primere, vključno s profilaktičnimi cepivi za preprečevanje nalezljivih bolezni, terapevtskimi onkološkimi cepivi in zdravili, zdravljenjem tumorjev, beljakovinami nadomestno zdravljenje, regenerativno medicino ter celično in gensko zdravljenje (CGT).
mRNA cepivo | mRNA terapevtika |
|
Proces | Izbirna storitev | Podrobnosti o storitvi | Dobavni rok (delovnik) | Izvedljivo |
Oblikovanje in optimizacija zaporedja mRNA | Oblikovanje in optimizacija kodirnih sekvenc | Oblikovanje zaporedja CDS in optimizacija kodona | 1-3 | Zaporedna datoteka |
Oblikovanje in optimizacija nekodirajočih zaporedij | Oblikovanje in optimizacija UTR, polyA sekvenc | |||
Priprava plazmida transkripcijske predloge | Priprava rekombinantnega plazmida | Genska sinteza | 7-10 | |
Pomnoževanje in ekstrakcija plazmida | 4 | |||
Linearizacija in čiščenje plazmidov | ||||
In vitro transkripcija mRNA | Kotranskripcijska omejitev (metoda v enem koraku) | In vitro transkripcija (IVT) / Cap analog | 1-2 | N / A |
Nukleotidne modifikacije (UTP/CTP modifikacije) | ||||
Odstranitev predloge DNA (DNase I) | ||||
Encimsko zapiranje (postopek v dveh korakih) | IVT | 2-3 | ||
Nukleotidne modifikacije (UTP/CTP modifikacije) | ||||
Odstranitev predloge DNA (DNase I) | ||||
Čiščenje mRNA (litijev klorid/magnetne kroglice) | ||||
Encimsko zapiranje | ||||
Čiščenje mRNA | Konvencionalna shema čiščenja | Obarjanje litijevega klorida | 1 | mRNA zdravilna snov |
Čiščenje z magnetnimi kroglicami | ||||
Shema čiščenja kromatografske kolone | Kombinacija več kromatografskih metod | 1-2 | ||
Izmenjava medpomnilnika | Ultrafiltracija | 1 | ||
Liofilizacija mRNA | Liofilizacija | Predzamrzovanje | 2-3 | mRNA liofiliziran prašek |
Primarno sušenje (sublimacija) | ||||
Sekundarno sušenje (desorpcija) | ||||
Enkapsulacija mRNA | LNP inkapsulacija | LNP inkapsulacija | 2-3 | mRNA-LNPDrug izdelek |
Koncentracija in izmenjava pufra | ||||
Analiza kakovosti mRNA | mRNA zdravilna snov/liofiliziran prašek | Koncentracija, čistost | 1 | Poročilo o preskusu |
Celovitost, učinkovitost zapiranja, porazdelitev repa polyA | 2-5 | |||
mRNA-LNP zdravilo | Učinkovitost inkapsulacije | 1 | ||
Velikost in porazdelitev delcev | ||||
Površinski naboj | ||||
Validacija izražanja mRNA | Ocena celic 293T | Prevleka celic | 4 | |
Prehodna transfekcija celic | ||||
Opazovanje fluorescenčnega signala | 1-3 | |||
Western blot (WB)/encimski imunski test (ELISA) |
5' Cap |
▪ Brez pokrova ▪ Cap0, co-capped ▪ Cap1, co-capped ▪ Cap1, encimsko zapiranje |
5' UTR/3' UTR |
▪ Zaporedje Nature UTR ▪ Mutant/Inženiring UTR zaporedje |
3' PolyA rep |
▪ 100A ~120A rep (priporočeno) ▪ Segmentiran poliA rep ▪ Drugi repi po meri |
Modificirani nukleozidi |
▪ Nespremenjene baze ▪ Psevdouridin (Ψ) ▪ N1-metilpsevdouridin (N1Ψ) ▪ 5-metilcitozin (m5C) ▪ 5-metiluridin (m5U) ▪ 5-metoksiuridin (5moU) ▪ 2-tiouridin (s2U) ▪ 2'-O-metil-U ▪ Druge spremembe |
Tok integriranih storitev
Zagotovite vrsto storitev od oblikovanja zaporedja na sprednji strani do priprave mRNA v ozadju, nadzora kakovosti in validacije izražanja.
Mednarodno vrhunsko načrtovanje zaporedij in optimizacija
Profesionalna zasnova in optimizacija zaporedja mRNA olajšata učinkovito izražanje mRNA.
Raznolike nukleotidne modifikacije
Učinkovito poveča izražanje mRNA in zmanjša neželene imunske odzive mRNA.
Zrela čistilna platforma
S kombiniranjem konvencionalne in samozasnove metode čiščenja dobimo vzorce mRNA z visoko čistostjo
Popolna platforma QC
Obogatite možnosti QC za izpolnjevanje zahtev rutinskih testov, kot so koncentracija, čistost A260/280 in celovitost, kot tudi visoke zahteve za nadzor kakovosti, kot je učinkovitost omejevanja/razporeditev poliA.
Hitra dostava
Prilagojeno mRNA je mogoče dostaviti v 7 dneh, razen pri sintezi zaporedja zunanjih izvajalcev.