Sinteza saRNA po meri
Samoojačevalna mRNA (saRNA), znana tudi kot replikonska RNA, kodira zaporedja mRNA in vitro transkripcije (IVT) in gene virusne replikaze, pridobljene iz alfavirusa ali flavivirusa. Geni virusne replikaze omogočajo samopomnoževanje mRNA, kar ima za posledico povečano izražanje beljakovin in najmanjši zahtevani odmerek RNA v primerjavi z nepomnoženimi mRNA. Drugi vidik je, da je saRNA razmeroma velika molekula (več kot 14 kb).
Yaohai Bio-Pharma je vzpostavil nabor tehnologij za sintezo mRNA za zagotavljanje mRNA brez pomnoževanja in mRNA s samopomnoževanjem (1000 nt~14000 nt), kot so zasnova in optimizacija zaporedja, IVT, čiščenje, liofilizacija in inkapsulacija lipidnih nanodelcev (LNP). . Vsi izdelki so izdani v skladu s strogimi standardi nadzora kakovosti.
Slika 1 Strukturne značilnosti IVT mRNA: običajna, krožna in samopomnoževalna mRNA.
Značilnosti zaporedja samopomnoževalne mRNA
Samopomnoževalna RNA obsega štiri nestrukturne proteine (označene kot nsP1, nsP2, nsP3 in nsP4), ki izhajajo iz alfavirusov, virusa venezuelskega konjskega encefalitisa (VEEV). Med temi ima nsP1 dvojne encimske aktivnosti, in sicer GTase in N7MTase, medtem ko ima nsP2 aktivnost RTPase, ključno za omejevanje mRNA IVT za ustvarjanje strukture Cap 0. Poleg tega nsP2 služi kot proteaza in helikaza, kar olajša zapleteno obdelavo celotnega kompleksa nsP. Natančna funkcija nsP3 ostaja nedosegljiva, vendar sodeluje v interakcijah z različnimi proteini gostiteljskih celic in tako prispeva k oslabitvi protivirusnega odziva, ki ga sproži gostitelj.
Regija subgenomskega promotorja alfavirusa (SGP) se nahaja pred zanimivim genom (GOI). Element SGP olajša začetek transkripcije GOI tako, da obide branje zaporedja, ki kodira virusne nsP proteine.
Slika 2 Sinteza in celični testi eGFP saRNA platforme Yaohai Bio-Pharma RNASci.
Rešitve po meri saRNA
Protokol sinteze saRNA je podoben mRNA: Sinteza mRNA po meri
- Oblikovanje zaporedja
- Priprava plazmidne šablone
- in vitro transkripcija (IVT)
- Encimsko omejevanje mRNA
- Omejitev kotranskripcije mRNA
- Čiščenje mRNA
- Liofilizacija mRNA
- Enkapsulacija LNP
- Analiza in testiranje
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
