Biološke snovi so kompleksne velike molekule, posebej občutljive na okoljske dejavnike: temperaturo, oksidacijo, svetlobo, ionsko vsebino in presrežek. Ključno je izvesti studije stabilnosti snovi in končnega izdelka pod namenjenimi pogoji hranjenja, pospešenimi pogoji in prisilno degradacijskimi pogoji. Podatki o stabilnosti se običajno uporabljajo za podporo rokov uporabe, datumov poteka ročnega obdobja in pogojev hranjenja.
V skladu z navodili ICH Q5C ponujamo Yaohai Bio-Pharma storitve studij stabilnosti za proteine, peptide, plazmide in mRNA, vključno s dolgoročnimi studijami stabilnosti, pospešenimi studijami stabilnosti in prisilno degradacijskimi studijami. Poleg tega imamo vse potrebne zmogljivosti za shranjevanje vzorcev in analizo ključnih kakovostnih lastnosti (CQA), da zbremenimo podatke o stabilnosti.
Uredbeni zahtevi za studije stabilnosti
Po smernicah ICH Q5C, "Pravilno podpirajoča podatki o stabilnosti morajo biti razviti za biotehnične/biološke produkte, saj jih lahko mnoge zunanje pogoji vplivajo na moč, čistoto in kakovost izdelka. Tudi je zelo priporočljivo, da se študije izvedejo za snov in končni izdelek pod pospešenimi in stresnimi pogoji."
Studije stabilnosti v realnem času (dolgoročne)
V studijah stabilnosti v realnem času (dolgoročnih) je snov ali izdelek shranjen pod namenjenimi pogoji shranjevanja in spremljan vse do tega, ko se biološke lastnosti spremenijo izven sprejemljivih meja. Rezultat dolgoročnih študij stabilnosti je določitev roka uporabe, datuma poteka, pogojev shranjevanja ter intervalov vzorčenja/izkuščanja.
Tabela 1. Frekvenca testiranja v dolgoročnih študijah stabilnosti predobraznih biologijev
| Roka uporabe |
Intervali testiranja |
Časovne točke |
| 1 leto ali manj |
Mesečno v prvih 3 mesecih;
Vsakih 3 mesece kasneje
|
Na 0, 1, 2, 3, 6, 9 in 12 mesecih |
| Več kot 1 leto |
Vsakih 3 mesece v prvi leti;
Vsakih 6 mesecev v drugem letu;
Letno zatem
|
Na 0, 3, 6, 9, 12, 18, 24, 36 mesecih in letno zatem |
Pospešene stabilnostne študije
Priporočena temperatura hranjenja injektibilnih biofarmacevtskih sredstev je običajno med 2 in 8℃. Pospešene stabilnostne študije se izvajajo z krajšim trajanjem pod pospešenimi pogoji, kot so visoke temperature. Podatki o stabilnosti so priznani kot podpora za stabilnost produkta in jih široko uporabljajo pri določanju roka uporabe in datuma poteka, ter pri razvoju sestavin.
Tabela 2. Primeri pospešenih stabilnostnih študij
| Studije stabilnosti |
Pospešeni pogoji |
Vzorčevalne točke |
| Pospešene stabilnostne študije |
visoka temperatura
relativna vlažnost
|
Ob 0, 1, 2, 3, 6 mesecih |
Studije prisilne degradacije
Cilj studij prisilne degradacije je zbrati informacije o stabilnosti pod stresnimi pogoji, kot so visoke temperature, vlaga, svetloba, oksidacija, zamrznitev-otepanje ali mehanski stres (stirkanje, presreževanje). Studije prisilne degradacije snovi ali izdelka v ekstremnih pogojev lahko pomagajo razpoznati ključne dejavnike/parametre, ki vodijo do degradacije biologičnih snovi. Te podatke je uporabno za oceno robustnosti pri formulaciji in proizvodnem postopku.
Tabela 3. Primeri studij prisilne degradacije
| Napetost |
Stresni pogoji |
Čas trajanja |
| Temperatura |
Visoka temperatura (npr., 25℃, 30℃, 37℃, 40℃) |
Dnevi-mesece |
| Vlažnost |
Relativna vlažnost (0~100%) |
Dnevi-mesece |
| Light |
Najmanj 1,2 milijona lx h in 200 W h/m2 |
Nekaj dni |
| Mrznjenje-odmrzavanje |
mrznjenje–odmrzavanje (od -20℃, -80℃ do 15℃) |
1~5 ciklov |
| Klanjanje, mešanje |
50~500 obr./min |
Ure-dnevi |
Analitične metode za podporo študijam stabilnosti
| Ključne kakovostne lastnosti (CQAs) |
Analitične metode |
| Skupno vsebino beljakovin |
UV, BCA, Bradford, Lowry |
| Vidni delci |
Vizualna preverjanja |
| Agregacija, fragmenti |
Dinamično osvetljevanje Zarno izključujoča kromatografija (SEC) HPLC/UPLC, Kapilarna elektroforeza CE (CGE, CZE, cIEF/iCIEF), SDS-PAGE brez reduciranja |
| Peptidska kartiranja in sekvenciranja |
LC-MS/MS |
| Disulfidne vezi |
LC-MS/MS |
| PTM (oksidacija, izomerizacija, deamidacija, glikozilacija) |
LC-MS/MS |
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
