Profiliranje N-glikanov je bistveno za proizvodnjo biofarmacevtskih izdelkov. Yaohai Bio-Pharma zagotavlja storitev profiliranja N-glikana z uporabo tekočinske kromatografije-masne spektrometrije (LC-MS) sproščenih in označenih glikanov. Splošni koraki za pripravo vzorca N-glikanov vključujejo razgradnjo glikoproteina (GP), deglikozilacijo, čiščenje, označevanje/derivatizacijo in ekstrakcijo v trdni fazi (SPE).
Sodelovali smo pri strukturni karakterizaciji beljakovin različnih velikih molekul, vključno z rekombinantnimi podenotnimi cepivi, nanotelesi/VHH/enodomenskim protitelesom (sdAbs), fragmenti protiteles, hormoni/peptidi, citokini, rastnimi faktorji (GF), encimi, kolageni, itd.
Regulativne zahteve za profiliranje N-glikana
V skladu s smernico ICH Q6B se »za glikoproteine določa vsebnost ogljikovih hidratov (nevtralni sladkorji, aminosladkorji in sialne kisline). Poleg tega se v največji možni meri analizira struktura verig ogljikovih hidratov, oligosaharidni vzorec (profil antene) in mesto(a) glikozilacije polipeptidne verige.
Analitična metoda
| Analiza |
Metode |
| N-glikansko profiliranje |
Analiza sproščenih in označenih glikanov s tekočo kromatografijo in masno spektrometrijo (LC-MS) |
Postopki
1. Encimsko sproščanje glikana s peptidno N-glikozidazo F (PNGase F)
2. Derivatizacija sproščenih glikanov z 2-aminobenzamidom (2-AB)
3. Čiščenje pobranih N-glikanov na koloni TSK Amide - 80, če so prisotne velike količine detergentov, nehlapnih soli ali materialov s prostimi amino skupinami
4. Označevanje s fluorescenčnim 2-aminobenzamidom (2-AB)
5. LC-MS analiza označenih N-glikanov
6. Analiza podatkov
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
