Pomen razvoja nadaljnjih procesov (DSP).
Celotna fermentacijska brozga vsebuje ciljni protein ali plazmid ter nečistoče, povezane z izdelkom in procesom, npr. agregate, substrate mikrobnih celic, proteine gostiteljskih celic (HCP), DNK gostiteljskih celic (HCD), endotoksin in antibiotike.
Zato je ključnega pomena zasnovati učinkovit DSP, postopek čiščenja, za odstranitev določenih nečistoč in proizvodnjo visoko prečiščene in visokokakovostne zdravilne učinkovine. Poleg tega lahko optimizacija postopka čiščenja pomaga povečati izkoristek izdelka, zmanjšati stroške ter izboljšati razširljivost in ponovljivost postopka.
Ključne besede: razvoj procesa, optimizacija in validacija, proces čiščenja, kromatografija, eliminacija nečistoč, odstranitev HCP, eliminacija HCD, odstranitev endotoksina, denaturacija in ponovno zlaganje beljakovin, sestavljanje VLP, konjugacija
Uporaba: Biofarmacevtska industrija, humana medicina, medicina za živali, cepiva, rekombinantna biološka zdravila z velikimi molekulami, rekombinantna biološka zdravila, biološki reagent
DSP rešitve podjetja Yaohai Bio-Pharma
Imamo bogate izkušnje z izolacijo ciljnih proteinov ali plazmidov iz kompleksnih matrik z razvojem in optimiziranjem nadaljnjega procesa čiščenja. Obstajajo različne vrste operacij enote, primernih za čiščenje bioloških zdravil, vključno s centrifugiranjem, filtracijo, homogenizacijo, alkalno lizo, ultrafiltracijo, obarjanjem, denaturacijo in ponovnim zvijanjem beljakovin, kromatografijo itd.
Naše razpoložljive storitve razvoja čiščenja vključujejo:
- Razvoj celotnega procesa čiščenja od zbiranja celic ali supernatanta do končne učinkovine.
- Optimizacija postopka čiščenja na podlagi nečistoč, povezanih z izdelkom in procesom, za povečanje kakovosti in varnosti izdelkov, npr. HCP, HCD, endotoksin.
- Opredelitev in optimizacija ključnih parametrov v eni ali več operacijah enote, vključno z lizo celic, filtracijo tangencialnega toka, presejanjem smol, kromatografijo, denaturacijo in ponovnim zlaganjem beljakovin itd.
- Optimizacija procesa v smislu kakovosti, donosa, predelave, stroškov in razširljivosti.
- Validacija nadaljnjega procesa čiščenja.
- Ocena obsega parametrov na podlagi tveganja in načrtovanje eksperimentov (DoE) pri modeliranju procesov.
Podrobnosti o storitvi
Standardizirane platforme za čiščenje beljakovin ali plazmidov temeljijo na več surovih korakih čiščenja in manj kot 4 korakih kromatografije, vključno z zajemanjem, vmesnim čiščenjem in poliranjem.
| Podrobnosti o storitvi |
Operacije enote |
parametri |
| Surovo čiščenje |
Centrifugiranje |
Hitrost vrtenja, čas |
| Visokotlačna homogenizacija |
Skupna vsebnost trdnih snovi, tlak, cikli |
| Kontinuirana alkalna liza |
Razmerje med resuspendiranimi celicami in raztopino za lizo, čas lize |
| Filtracija tangencialnega toka |
Material membrane in velikost por, hitrost dovajanja, transmembranski tlak (TMP), razmerje med prostornino in površino membrane |
| Padavine |
Vrsta in koncentracija usedline, dodatek, pH, temperatura, čas |
| Denaturacija in ponovno zvijanje |
Solubilizacija beljakovin inkluzijskega telesa |
Koncentracija denaturanta (npr. sečnina, gvanidin HCl, močan ionski detergent), detergenti (npr. natrijev dodecil sulfat, SDS), reducenti (npr. ditiotreitol, DTT), kelati (etilendiamintetraocetna kislina, EDTA), temperatura, čas |
| Ponovno zvijanje beljakovin |
Metode ponovnega zvijanja (redčenje, dializa ali SEC ponovno zvijanje), koncentracije beljakovin, pufri, pH, temperatura, čas, oksidacijska in redukcijska sredstva (npr. glutation, GSH/oksidirani glutation, GSSH, DTT/GSSH, cistein/cistin), dodatki majhnih molekul (L-arginin, sečnina, gvanidin/HCl in detergenti) |
| Zajem, vmesno čiščenje in poliranje |
AC (afinitetna kromatografija) |
Več vrst kromatografske smole/kolone (npr. AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), dolžina in premer kolone, sestava pufra, volumen vbrizga, sestava mobilne faze (adsorpcija in desorpcija), pH, hitrost pretoka, vezava, Pogoji pranja in elucije. |
| IEX (anionska ali kationska izmenjevalna kromatografija) |
| HIC (hidrofobna interakcijska kromatografija) |
| Razsoljevanje in/ali izključitvena kromatografija (SEC) |
| RPC (kromatografija z reverzno fazo) |
| MMC, mešana kromatografija |
Študija primera
Case 1
Naročeno nam je, da razvijemo in optimiziramo nadaljnji postopek čiščenja, da povečamo čistost beljakovin s 85 % na 90 %, hkrati pa zmanjšamo korake kromatografije.
Yaohai je zagotovil robusten in razširljiv postopek čiščenja s 3 stopnjami kromatografije za ciljni protein, bakterijsko alergijo. In končna čistost je dosegla 95%.
Case 2
Yaohaija je naša stranka imenovala za optimizacijo procesa odstranjevanja endotoksinov v cepivu proti virusom podobnim delcem (VLP).
Naša ekipa je izvedla optimizacijo parametrov kromatografije in pripravila zdravilno učinkovino s čistostjo 98% in ostankom endotoksina 12.8EU/mg.
Naše izkušnje
- Sodelovali smo pri razvoju in proizvodnji različnih velikih molekul, vključno z rekombinantnimi podenotnimi cepivi, VLP, hormoni (insulin, GLP-1, rastni hormon), citokini (interlevkin-2/IL-2, IL-15, IL-21). ), rastni faktorji (EGF, FGF, NGF), nanotelesa/enodomenska protitelesa (sdAbs), encimi itd.
oprema
Uporabljamo vodilne sisteme AKTA Pure, AKTA Avant in preparativne HPLC za izvedbo različnih kromatografskih metod, vključno z afinitetno, ionsko izmenjavo, hidrofobno interakcijo, reverzno fazo in kromatografijo z izključitvijo velikosti.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
