Pomen razvoja spodnjega procesa (DSP)
Celoten fermentacijski brod vsebuje ciljno beljakvino ali plazmid, ter onesnaževala povezana z produkcijskim postopkom in izdelkom, na primer agregate, mikrobiološke celinske snovi, beljakvine gostiteljskih celic (HCP), DNS gostiteljskih celic (HCD), endotoksin in antibiotike.
Zato je ključno zasnovati učinkovit DSP, počistitveni postopek, ki odstrani določena onesnaževala in producira visoko počisteno in kakovostno snov za zdravila. Poleg tega lahko optimizacija počistitvenega procesa pomaže pri povečanju povratnice izdelka, zmanjšanju stroškov ter izboljšanju skaliranosti in ponovljivosti procesa.
Ključne besede: razvoj procesa, optimizacija in validacija, počistitveni proces, hromatografija, odstranjevanje nečistin, odstranjevanje HCP, eliminacija HCD, odstranjevanje endotoksinov, denaturation in ponovno zvijanje proteina, sestavljanje VLP, konjugiranje
Uporaba: biotehniška farmacevtska industrija, človeška medicina, živalska medicina, cebulje, rekombinantni veliki molekuli biologov, rekombinantni biologi, biološki srednji
Rešitve DSP Yaohai Bio-Pharma
Imamo obsežen izkušnje pri izolaciji ciljnih proteinov ali plazmidov iz kompleksnih matrik s razvojem in optimizacijo počistitvenega procesa. Obstajajo različne vrste enotskih operacij, primerne za počistitev biologov, vključno z centrifugiranjem, filtracijo, homogenizacijo, alkalno liho, ultrafiltracijo, sedimentacijo, denaturation in ponovno zvijanje proteina, hromatografijo itd.
Na voljo imamo storitve za razvoj počistitve, ki vključujejo:
- Razvoj celotnega počistitvenega procesa od zbiranja celic ali nadležine do končnega dejanskega sestavnika.
- Optimizacija procesa očiščevanja na podlagi izdelkov in procesno povezanih onesnaževal, da se povišajo kakovost in varnost izdelka, npr. HCP, HCD, endotoksin.
- Določitev in optimizacija ključnih parametrov v eni ali več enotnih operacijah, vključno s celinsko lihanjem, tangencialnim tokovnim filtriranjem, preskusom črnkal, hromatografijo, denaturation in preložitvijo proteina itd.
- Optimizacija procesa glede na kakovost, dobiček, povratno vrednost, stroške in skaliranje.
- Preverjanje spodnjega procesa očiščevanja.
- Ocena območja parametrov na podlagi tveganj in načrtovanje poskusov (DoE) v modeliranju procesa.
Podrobnosti storitev
Standardizirane platforme za očiščevanje proteiničnih ali plazmidnih struktur so temeljene na več krudnih korakih očiščevanja in manj kot 4 korakih hromatografije, vključno z hvapanjem, medsebojnimi očiščitvami in zaključnimi prilagoditvami.
| Podrobnosti storitev |
Enote delovanja |
Parametri |
| Krudno očiščevanje |
Centrifugacija |
Hitrost vrtenja, Čas |
| Homogenizacija visokim tlakom |
Skupno vsebinsko snov, tlak, cikli |
| Zvezna alkalinska liza |
Razmerje ponovno raztopljenih celic in rešitve za lizo, čas lize |
| Tangencialno točkovno filtriranje |
Material membrane in velikost por, hitrost pretoka hranika, transmembranski tlak (TMP), razmerje volumena filtrata in površine membrane |
| Odpadovanje |
Vrsta in koncentracija odpadovalca, dodatek, pH, temperatura, čas |
| Denatracija in znova zlaganje |
Solubilizacija beljakovin iz inkluzijskih teles |
Koncentracija denaturanta (npr. Urea, Guanidin HCl, Močni ionski detergent), Detergenti (npr. Sodijev dodecilsulfat, SDS), Redukcioni sredstva (npr. Ditiotreitol, DTT), Hvaležni sredstva (Etilenendiamintetraetonska kislina, EDTA), Temperatura, Čas |
| Ponovno zlaganje proteina |
Metode ponovnega zlaganja (razreditev, dializa ali SEC ponovno zlaganje), Koncentracije proteina, Buferji, pH, Temperatura, Čas, Oksidacijska in redukcijska sredstva (npr. Glutatyon, GSH/Oksidiran glutatyon, GSSH, DTT/GSSH, Cistein/Cistin), Dodatki malih molekul (L-arginina, Urea, Guanidin/HCl, in Detergenti) |
| Hvat, Medsebojna očiščevalna obdelava in zaključno poliranje |
AC (Afinostna hromatografija) |
Nekaj vrst hromatografskega rezina/stolpa (npr. AC, IEX, HIC, SEC, RPC, MMC), Dolžina in premer stolpa, Sestava buferja, Injecijski prostor, Sestava mobilne faze (Odsorpcija in Desorpcija), pH, Hitrost toka, Pogoji povezovanja, umivanja in eliacije. |
| IEX (Anionska ali Kationska izmenična hromatografija) |
| HIC (Hidrofobna interakcijska hromatografija) |
| Odsevanje in/ali kromatografija izločitve po velikosti (SEC) |
| RPC (Obrnljiva fazna kromatografija) |
| MMC, Mešana moderna kromatografija |
Studija primerov
PRIMER 1
Nam je bilo zatočeno, da razvijemo in optimiziramo proces počiščenja v določeni fazi, da povečamo čistost proteina s 85% na 90%, hkrati pa zmanjšamo korake kromatografije.
Yaohai je izdelal robusten in skalabilen proces počiščenja v treh korakih kromatografije za ciljni protein, bakterijsko alergeno. Končna čistost je dosežena na 95%.
PRIMER 2
Yaohai je bil imenovan od strani našega klienta, da optimizira proces odstranjevanja endotoksinov za virusno podobno delico (VLP) cepiva.
Naša ekipa je optimizirala parametre kromatografije in pripravila snov z 98% čistostjo in ostanki endotoksina 12,8EU/mg.
Naše izkušnje
- Bili smo vpleteni v razvoj in proizvodnjo različnih velikih molekul, vključno s rekombinantnimi podenotinčnimi cepivi, VLP-jemi, hormoni (insulin, GLP-1, hormon rasti), citokinskega (Interleukin-2/IL-2, IL-15, IL-21), rastnih faktorjev (EGF, FGF, NGF), nanatelejcev/pojedinskih domenskih antiteles (sdAbs), enzimov itd.
Oprema
Za izvajanje različnih kromatografskih metod, vključno z afinostno, ionsko zameno, hidrofobnim interakcijam, obratno fazo in kromatografijo po velikosti izključevanja, uporabljamo prvedežanske sisteme AKTA Pure, AKTA Avant in Pripravne HPLC.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
