Zasedenost mesta N-glikozilacije je fiziološka značilnost glikoproteinov in v glavnem proizvaja N-glikan. Storitev analize zasedenosti mesta N-glikozilacije Yaohai Bio-Pharma se izvaja s prebavo, sproščanjem, obogatitvijo in analizo z uporabo tekočinske kromatografije-elektrosprejne ionizacijske masne spektrometrije-masne spektrometrije (LC-ESI-MS/MS).
Sodelovali smo pri strukturni karakterizaciji beljakovin različnih velikih molekul, vključno z rekombinantnimi podenotnimi cepivi, nanotelesi/VHH/enodomenskim protitelesom (sdAbs), fragmenti protiteles, hormoni/peptidi, citokini, rastnimi faktorji (GF), encimi, kolageni, itd.
Regulativne zahteve za zasedenost mesta N-glikozilacije
V skladu s smernico ICH Q6B se »za glikoproteine določa vsebnost ogljikovih hidratov (nevtralni sladkorji, aminosladkorji in sialne kisline). Poleg tega so struktura verig ogljikovih hidratov, oligosaharidni vzorec (profil antene) in mesto(a) glikozilacije polipeptidne verige analizirani v največji možni meri.«
Analitična metoda
| Analiza |
Metode |
| Zasedenost mesta N-glikozilacije |
LC-MS po razgradnji z deglikozilazo in proteazo |
Postopki
1. Proteinska prebava beljakovin za ustvarjanje majhnih peptidnih fragmentov.
2. Sprostitev N-glikana z uporabo endoglikozidaze H ali PNGaze F. Endoglikozidaza H cepi vez med dvema ostankoma GlcNAc v jedru N-povezanih glikanov, medtem ko je PNGaza F glikoamidaza, ki prekine vez med GlcNAc in Asn ter osvobodi celotno sladkorno verigo in pretvorbo Asn v Asp s povečanjem mase za 1-Da.
3. Obogatitev N-glikopeptida s HILIC (Hidrofilna interakcijska tekočinska kromatografija)
4. Analiza zasedenosti N-povezanega mesta glikozilacije z uporabo LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
