Zasedenost N-glikozilacijonskih mest je fiziološčna značilnost glikoproteinov in glavno proizvaja N-glikane. Storitev analize zasedenosti N-glikozilacijonskih mest od strani Yaohai Bio-Pharma se izvaja s pomočjo razgradnje, sprostitev, obogatitve in analize z Uporabno kromatografijo-Elektrospraysko jonizacijo Dvojne masne spektroskopije (LC-ESI-MS/MS).
Bili smo vpleteni v karakterizacijo strukture proteina različnih velikih molekul, vključno s rekombinantnimi podjediničnimi cepivami, nanotijelami/VHHs/ enodomenskimi tijelom (sdAbs), odlomki tijel, hormoni/peptidi, citokinskega, rastnih faktorjev (GF), enzimov, kolagenov itd.
Uredbena zahteva za zasedenost N-glikozilacijonskih mest
Po smernici ICH Q6B, "za glikoproteine se določi količina ogljikov (neutralni šećeri, aminoshecera in sialne kisline). Poleg tega so strukture ogancastih verižev, vzorec oligosacharidov (antenski profil) in lokacija glikozacij v polipeptidski verigi analizirane v največji možni meri."
Analitična metoda
| Analiza |
Metode |
| Zasedenost N-glikozilacijskih mest |
LC-MS po deglikozilaciji in proteazni degljavi |
Postopki
1. Degljava proteina za ustvarjanje majhnih peptidskih odlomkov.
2. Osvoboditev N-glikanov z uporabo endoglikozidaza H ali PNGase F. Endoglikozidaza H razcepa povezavo med dvema GlcNAc residui v jedru N-povezanih glikanov, medtem ko je PNGase F glicoamidaza, ki razcepa povezavo med GlcNAc in Asn, s čimer osvobodi celoten ogancasti verižec in pretvori Asn v Asp z masnim povečanjem za 1-Da.
3. Bogatjenje N-glikopeptidov prek HILIC (Hidrofilna interakcijska tekočinska kromatografija)
4. Analiza zasedenosti N-povezanih glikozacij s pomocjo LC-ESI-MS/MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
