Podatki o peptidnem kartiranju s pomočjo tehnike likvidne kromatografije-masovne spektrometrije (LC-MS) bodo zagotovili veliko informacij o prvi in višji strukturi nativnih in rekombinantnih beležin, vključno z pokritjem sekvence aminokislinskih oseb, posmrtnimi spremembami (PTMs, npr. glikozacijon, oksidacijo, deamidacijo), disulfidnimi vezi itd.
Yaohai Bio-Pharma ponuja storitve analize peptidnega kartiranja za vaš ciljni protein s pomočjo LC-MS, da pospešite svoje raziskave strukture proteina.
Bili smo vpleteni v karakterizacijo strukture proteina različnih velikih molekul, vključno s rekombinantnimi podjediničnimi cepivami, nanotijelami/VHHs/ enodomenskimi tijelom (sdAbs), odlomki tijel, hormoni/peptidi, citokinskega, rastnih faktorjev (GF), enzimov, kolagenov itd.
Uredbeni zahtevki za peptidno kartiranje
Smernice ICHQ6B priporočajo: »Izbrana fragmentacija produkta v diskretne peptidne odlomke se izvaja z uporabo primernih enzimov ali kemičnih sredstev, in rezultirajoči peptidni odlomki se analizirajo s HPLC ali drugo primerno analitično postopkom. Peptidni odlomki je mogoče identificirati čim več z tehnikami, kot so analiza sestave aminokislinskih oseb, N-terminalna sekvenciranja ali masovno spektrometrija (MS). Peptidska kartiranja dejanskega snovi ali farmacevtskega produkta (DP) z uporabo ustrezen validiranega metode je pogosta metoda za potrditev želenega strukturnega sestava produkta za pustitev serije.«
Analitične metode
| Analiza |
Metode |
| Preslikava peptidov |
Proteaza razgradnja in tekoča hromatografija-masovna spektrometrija (LC-MS) |
Analitični postopek
1. Redukcija in alkilacija
Cilj je zmanjšati disulfidne mostove in blokirati ustvarjeno prosti tiohl. Zmanjšanje disulfidnih mostov pomaga odpreti strukturo proteina, kar naredi proteolitično trditev učinkovitejšo. Ta korak bo tudi prekinil mostove med veriži v primeru večverižnih proteinov, ki imajo disulfidne mostove, ki povezujejo veriže (npr. monoklonalni antibodi, mAbs).
2. Trditev proteina s enzimi
Cilj je razbiti protein na peptide. Izbrali smo enzime na podlagi teoretične sekvence proteina in znanja o teoretični trditvi proteina z enzimi. S takšnim izbiranjem enzimov bi moral rezultat biti najboljša analiza peptidske karte.
3. Analiza trdenih peptidov Uporaba on-line obratne faze-Vissoko učinkovite tekoče kromatografije s ultravijolično (UV) in elektrosprajsko-masno spektrometrijsko detekcijo (LC/ES-MS).
Ločevanje peptidov na podlagi polarnosti z LC (obratna faza-LC)
Kot peptid izteče iz LC stolpa, bo masa spektrometer generiral masne podatke skupaj z informacijami o razcepljenih ionih, kar nam omogoči določitev zaporedne informacije. Uporabimo zaporedno informacijo za potrditev identitete peptida in za zagotavljanje osnovnih podatkov.
Tudi informacije o razcepljenju lahko generiramo, ko peptidi vstopajo v vir masa spektrometra iz LC stolpa. Odvisno od zahtev študije je to bodisi selektivni LC-MS/MS ali neoselektiven, kar se lahko razbere kot oblika tandemnega MS.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
