Kar zadeva serijsko pripravo prekurzorjev RNA, je pogosto uporabljena metoda in vitro transkripcija (IVT). Reakcija IVT uporablja linearizirano plazmidno DNA, ki vsebuje promotor T7, kot predlogo in sintetizira prekurzor RNA z nukleozid trifosfati (NTP) kot substrat v prisotnosti polimeraze T7 RNA.
Metode ciklizacije in vitro vključujejo kemično ligacijo, encimsko ligacijo in metodo permutiranega intron-eksona (PIE). Kemična ligacija in encimska ligacija sta primerni za ciklizacijo krajših RNA. Ko je fragment večji od 100 nt, se stopnja ciklizacije močno zmanjša. Nasprotno pa lahko metoda nukleaze, ki temelji na sistemu PIE, doseže ciklizacijo 8 kb zaporedij.
Pod katalizo gvanozin trifosfata (GTP) je struktura PIE podvržena ciklizaciji ekstra-intronskih sekvenc. V kombinaciji z razumno strategijo za povečanje stopnje ciklizacije lahko Yaohai Bio-Pharma doseže ciklizacijo do 4 kb zaporedij z učinkovitostjo ciklizacije več kot 80 %.
Reakcija ciklizacije RNA in vitro poteka na naslednji način:
Prekurzor RNA se sintetizira s transkripcijo in vitro, komponenta PIE pa dokonča samospojitev pod katalizo GTP, da tvori circRNA.
Storitve Podrobnosti
| Proces |
Podrobnosti o storitvi |
Dobavni rok (delovnik) |
| In vitro transkripcija in cirkulacija |
Potrditev reakcijskega sistema |
1-2 |
| Reakcije transkripcije in ciklizacije in vitro |
| Prebava RNaze R |
| Optimizacija reakcije |
Reakcijska sestava, optimizacija časa |
2-5 |
Naše lastnosti
- Stroga zasnova testa in optimizacija
Doseže se lahko do 4 kb ciklizacije RNA.
- Visoka učinkovitost ciklizacije
Stopnjo ciklizacije več kot 80 % je mogoče doseči z racionalno strategijo optimizacije zaporedja.
S strogim nadzorom RNaz v eksperimentalnem okolju in potrošnem materialu je razgradnja RNK učinkovito preprečena.
Študija primera
In vitro ciklizacija in obogatitev circRNA
Na podlagi sistema PIE je Yaohai Bio-Pharma optimizirala zaporedje circRNA s stopnjo ciklizacije več kot 80 % z elektroforezo v agaroznem gelu (AGE). Z uporabo RNaze R za obogatitev circRNA rezultati elektroforeze z E-gelom kažejo, da je prekurzor linearne RNA prebavljen, po nadaljnjem čiščenju pa je mogoče odstraniti večino zarezane circRNA. Raztopino za čiščenje je sama razvila Yaohai Bio-Pharma.
Kroženje in vitro in obogatitev circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
