5'-end capping je bistvena modifikacija mRNA. mRNA s strukturami cap, zlasti strukture Cap1, olajšajo mRNA, da se izognejo prirojenim imunskim odzivom in vivo, kar ima za posledico učinkovito prevajanje beljakovin.
Encimsko omejevanje (dvostopenjska metoda) je običajna metoda omejevanja mRNA, podobno omejevanju v evkariontskih organizmih. Pod delovanjem niza encimov je 7-metilgvanin (m7G) povezan s 5'-koncem mRNA preko 5'-5' trifosfatne vezi in je podvržen metilacijski modifikaciji, da nastane pokrovna struktura Cap 1 (m7GpppN).
Diagram oblikovanja naravne strukture kapice
Tok reakcije encimskega omejevanja je naslednji:
Linearizirana plazmidna DNA se uporablja kot matrica za transkripcijo in vitro (IVT) v prisotnosti polimeraze T7, mRNA s 5' končno strukturo pa nastane po enostopenjskem čiščenju z uporabo encima za zapiranje vakcinije in 2'-O. -metiltransferaza.
Storitve Podrobnosti
Izbirna storitev |
Podrobnosti o storitvi |
Dobavni rok (dan) |
mRNA encimsko zapiranje |
Reakcija encimskega zapiranja |
1 |
Omejevanje optimizacije reakcije - neobvezno |
Oblikovanje in optimizacija reakcijskih komponent |
3 ~ 7 |
Naše lastnosti
- Zasnova in optimizacija reakcijske komponente za zapiranje
Komponenta reakcije omejevanja je optimizirana in proizvodnja transkripta mRNA se močno poveča.
- Preverjanje ekspresije in vitro
Zaprta mRNA se transfektira v celice 293T in lahko zazna ekspresijo ciljnega proteina.
S strogim nadzorom eksperimentalnega okolja in potrošnega materiala RNaseson je razgradnja mRNA učinkovito preprečena.
Študija primera
Platforma mRNA podjetja Yaohai Bio-Pharma je zgradila popoln reakcijski proces omejevanja.
Za eGFP mRNA, predprodukt mRNA, pripravljen z encimskim zapiranjem, je mogoče po 293-urni transfekciji celic 24T opaziti fluorescenčni signal eGFP (zelena fluorescenca) na visoki ravni, ki ga zazna Western Blot (WB), kar dokazuje, da Zeleni fluorescentni protein, izboljšan s ciljnim proteinom (eGFP), se lahko učinkovito izraža in vitro.
Izražanje encimsko omejene mRNA eGFP v celici 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
