Vse kategorije
enzimatsko zakrivanje mRNA

enzimatsko zakrivanje mRNA

5'-končna zaklepanje je bistvena sprememba mRNA. mRNA z zaklepni strukture, posebej Cap1 strukture, omogočajo mRNA izogibati si vgrajene imunskih odzivov v živih organizmah, kar pomeni učinkovito prevajanje proteina.

Enzimatsko zaklepanje (dvokorak method) je tradicionalna metoda zaklepanja mRNA, podobna procesu zaklepanja v eukariotskih organizmih. Pod delovanjem vrste enzimov se 7-metilguanin (m7G) poveže na 5'-koncu mRNA prek trifosfatne vezi 5'-5' in podlega metilaciji, ki oblikuje zaklepno strukturo Cap 1 (m7GpppN).

undefined

Diagram oblike naravne zaklepne strukture

Tok enzimatske zaklepne reakcije je naslednji:

Linearni plazmidni DNA se uporablja kot predloga za transkripcijo in vitro (IVT) v prisotnosti T7 polimeraze, in mRNA z 5' end-cap strukturo se oblikuje po enokorakem očiščanju s pomočjo vakcinije capping enzyme in 2'-O-metiltransferaze.

undefined

Podrobnosti storitev

Izbirne storitve

Podrobnosti storitev

Dobavni rok (dan)

enzimatsko zakrivanje mRNA

Enzimski capping reakcija

1

Optimizacija capping reakcije - izbirno

Načrtovanje in optimizacija sestavnih delov reakcije

3~7

Naše značilnosti
  • Dizajn in optimizacija komponent capping reakcije

Komponenta capping reakcije je bila optimizirana, kar je znatno povečalo proizvodnjo mRNA transkripta.

  • Verifikacija izražanja in vitro

Capped mRNA se transficira v 293T celice, in je mogoče zaznati izraz ciljnega proteina.

  • Strog nadzor RNase

S strogo kontrolijo RNase v eksperimentalnem okolju in potrošniških materialih se učinkovito prepreči degradacija mRNA.

Studija primerov

Platforma mRNA od Yaohai Bio-Pharma je razvila popoln proces zakrivanja.

Za eGFP mRNA, predproizvod mRNA pripravljen s enzymatskim zakrivanjem, se lahko 24 ure po transfekciji celic 293T opazi intenziven eGFP fluorescenčni signal (zeleno fluorescenca), ki ga zaznamemo s pomočjo Western Blot (WB), kar dokazuje, da se ciljni protein, izboljšana zelena fluorescenca (eGFP), učinkovito izraža v vitro.

图片

图片

Izraz enzymatsko zakrite eGFP mRNA v celici 293T

Pridobite brezplačno ponudbo

Get in touch