Pomen presejanja sevov
Preverjanje primernih gostiteljev je nujno za razvoj CMC bioloških zdravil, ki določa kakovost in doslednost izdelka in proizvodnega procesa. Neposredni cilj presejanja gostitelja je zagotoviti kandidatno primarno celično banko (PCB) z visokimi stopnjami izražanja in visoko stabilnostjo tako v smislu stabilnosti prehoda kot stabilnosti shranjevanja. Preverjanje primernega gostitelja je potrebno iz dveh glavnih razlogov:
- Prvič, izbrati mikrobnega gostitelja z visoko stopnjo izražanja. Obstaja več komercialno dostopnih sevov, ki se uporabljajo za izražanje različnih vrst beljakovin, kot so toksični proteini, topni proteini ali evkariontski proteini.
- Drugič, pregledati gostitelja z genetsko stabilnostjo. Testiranje genetske stabilnosti je ključna točka v celotnem proizvodnem življenjskem ciklu. Predlaga se, da je visoka genetska stabilnost priznana kot druga ključna značilnost za primeren sev.
Ključne besede: selekcija mikrobnega seva, presejanje mikrobnega seva, visoko zmogljivo presejanje bakterij ali kvasovk, presejanje visokoproducirajočega seva, presejanje visoko stabilnega seva, presejanje genetsko stabilnega seva Uporaba: humana medicina, medicina za živali, cepivo, sintetična biologija, rekombinantna velika molekula biološka zdravila, biološki reagent
Storitve presejanja sevov Yaohai Bio-Pharma
Z več kot 10-letnimi izkušnjami CDMO na področju mikrobnih bioloških zdravil podpiramo razvoj in proizvodnjo različnih velikih molekul, vključno z rekombinantnimi podenotnimi cepivi, virusom podobnimi delci (VLP), hormoni (insulin, GLP-1, rastni hormon), citokini ( Interlevkin-2/IL-2, IL-15, IL-21), rastni faktorji (EGF, FGF, NGF), nanotelesa/protitelesa z eno domeno (sdAbs), encimi itd.
Nabrali smo bogate izkušnje pri izbiri različnih vrst plazmidnih vektorjev in mikrobnih gostiteljev, vključno z bakterijami. Escherichia coli (E. coli), in kvas Pastirka (P. pastoris), Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae), Polymorpha Hansenula (H. polymorpha). Najdemo lahko najboljši izrazni sistem za vaša edinstvena biološka zdravila.
Zbrali smo različne mikrobne gostitelje z jasnimi viri in standardnim CoA, vključno z E.coli izražanje in izražanje kvasovk.
Podrobnosti o storitvi
|
Storitve
|
Podrobnosti o storitvi
|
Minimalna časovnica/dan
|
Rezultat
|
|
Konstrukcija seva (E. coli)
|
Transformacija plazmida (več gostiteljev)
|
5
|
COA komercialnih gostiteljev Strain konstrukcijsko poročilo
|
|
PCR preverjanje
|
|
Čiščenje seva
|
|
Ohranjanje seva
|
|
Konstrukcija seva (kvas)
|
Priprava kompetentnih celic kvasovk
|
10
|
|
Linearizacija plazmidov
|
|
Elektro transformacija
|
|
Preverjanje odpornosti/prehranske pomanjkljivosti
|
|
Čiščenje seva
|
|
Ohranjanje seva
|
|
Pregled primernega gostitelja
|
Ekstrakcija DNK plazmida ali genoma
|
15-20
|
Postopek presejanja gostitelja COA inženirskih sevov
|
|
PCR preverjanje, prebava z restrikcijskimi encimi
|
|
Sekvenciranje ciljnega gena
|
|
Preverjanje gostiteljev z visoko ekspresijo
|
|
Pregled gostiteljev z genetsko stabilnostjo
|
|
Ohranjanje seva
|
Študija primera
Ustrezen gostitelj izboljša raven izražanja beljakovin za 2.5-krat.
Zadolženi smo za razvoj visoko produktivnih izdelkov E. coli obremenitev. In poskusili smo tri vrste reklam E. coli gostitelji na podlagi značilnosti ciljnega proteina. Pokazalo se je, da sta seva S1-1 in S1-2 (slika A: pas 1,2, 3.5) izboljšala raven beljakovin za 3-krat kot začetni sev stranke (slika A: pas XNUMX).
Poleg tega je sev S1-1 pokazal visoko genetsko stabilnost (slika B) in je bil prepoznan kot kandidatni sev za primarno celično banko (PCB).
Naše storitvene značilnosti
Dokazano strokovno znanje z različnimi mikrobnimi gostitelji, npr. E. coli DH5α, TOP10, Trans10, BL21; P. pastoris SMD1168H, X-33, GS115, PichiaPink sev 1/2/3/4; S.cerevisiae in H. polymorpha.
Imamo izkušnje z E. coli periplazmatsko izločanje, izražanje topnih in inkluzijskih telesc, kot tudi znotrajcelično ali izločanje kvasovk. Ne dodajamo antibiotikov ali jih dodajamo v skladu z regulativnimi navodili.
Vzpostavimo visoko zmogljivo presejalno platformo za presejanje visoko produktivnih in stabilnih sevov iz več kot sto kandidatnih sevov.
Zagotovljeno je, da je proces inženiringa in presejanja sledljiv v skladu z dobrim upravljanjem podatkov in evidenc.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NE
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
