Rekombinantni enzim

Modalnost

Rekombinantni Enzimi

Rekombinantni enzim za terapevtsko uporabo

Terapevtski enzimi, pridobljeni prek biotehnoloških postopkov, so široko uporabljani pri več kliničnih aplikacijah, vključno z zamenjavno terapijo enzimov, degradacijo nagromadjenih metabolitov in toksinov, raka ter genome urejanje. Več terapevtskih enzimov se lahko proizvede v mikrobiološkem izražalnem sistemu.

Uporaba	enzimom	snovi	Tipični izdelki/potovanja
Zamenjava enzima v terapiji	Adenozinska deaminaza, ADA	Adenozin ali deoksiadenozin	Elapegademase-lvlr (Revcovi)
Zamenjava enzima v terapiji	Fenilalanin amonijev liáz, PAL	Fenilalanin	Pegvaliase-pqpz (Palynziq)
Degradacija akumuliranih metabolitov	Urikaza/Urat oksidaza	Mehkovar	Peglticaza (Krystexxa) Rasburicaza (Fasturtec)
	Kolagenaza	Kolagenova 'jazava'	Kolagenaza clostridium histolyticum (Xiaflex, Qwo, Santyl)
	Orežana plazmina	Kolagen, fibronektin in laminin	Ocriplazmin (Jetrea)
	Orežan aktivator plasminogena tkiva (tPA)	Plazminogen	Reteplazin (Retavase)
	IgG proteaza	Imunoglobulin G (IgG)	Imlifidaza (Idefrix)
	IgA Proteaza	Imunoglobulin A (IgA)	PKU308/AP308IGAN IgA proteaza
Degradacija toksinov	Karboxipeptidaza G2	Metotreksat	Glucarpidase (Voraxaze)
Rakova terapija	Enzim specifičen za asparagin	Asparagin	Asparaginaza (Elspar)Calaspargase pegol-mknl (Asparlas)
Urejanje genoma	Cas9 nukleaza	Ciljni gen	Exagamglogene autotemcel (Exa-cel, CTX001)

Rekombinantni enzim kot material

Uporabljajo se več enzimov v proizvodnji dolgo kodiranega RNA (npr. mRNA, saRNA, circRNA), proizvodnji konjugatov antibodi–droge (ADCs) in drugih. Mikrobijsko proizvedeni enzimi so stroškovno učinkovitejši kot ti iz siscobnih celic, zlasti pa sistem ekspresije E. coli.

Uporaba	enzimom	Funkcija
Enzymi za izdelavo linearnega RNA, brez RNase	Omejujoče endonukleaze	Linearna oblika plazmidne DNA (pDNA) za izogibanje ustvarjanju daljših transkriptov.
	T7 RNA polimeraza (T7 RNAP)	Se povežejo na T7 promotor in ustvarijo specifične RNA transkripte; Igrajo ključno vlogo med v vitro transkripcijo (IVT).
	Vakcinijev zakrivalski enzim	Dodajajo zakrilne strukture na 5′ konce IVT mRNA.
	Pirofosfatasa, neorganična (iPPase)	Preventirajo pirofosfat med IVT reakcijo.
	Inhibitor RNase, rekombinantni	Inhibirajo aktivnost RNase med IVT reakcijo.
	DNase I	Odstranite DNA predlogo.
Enzim za proizvodnjo circRNA, brez RNazae	Rnaza R	Degradiraj linearno RNA in obogati krožno RNA.
Enzym-sposobljeno vezovanje glikanov	Peptid-N-glikozidaza (PNGase F)	Premika amidsko vezavo med prvim sladkorjem GlcNAc in bočnim verižcem Asn297; Oslobodi glikane iz IgG antitela.
	Bakterijska transglutaminaza (BTG)	Spletna vezava nosilcev na določenem mestu za ustvarjanje ADC-jev.
	Sortaza A	Katalizirajte vezovanje proteinov.
	β1,4-galaktosidaza	Odpustite vse končne galaktoze in oblikujte homogeno G0 izoformo antibodies.
	β1,4-galaktosiltransferaza (Gal-T)	Premaknite šećer z kemikalno reaktivno funkcionalno skupino.
	α2,6-sialiltransferaza (Sial T)	Vključite končne sialinske kisline v prirodno glikanovo strukturo antibodyja.
Enzimski medijator glikanovega preoblikovanja in glicoingeniringa	Endo-N-aceilsuklozosaminidaza (ENGase)	Hidrolizirajte β1,4-glikozidično vezijo med GlcNAcβ1–4GlcNAc N-glikanov; Odstranite N-povezane glikane v regiji Fc IgG antibodies.
	Endoglikozidaza S (EndoS)
	Glikoziltranzferaze (GTs)	Prenesite N-glikan oksazolin na defukosilirane IgGs.
Drugo	Enzimi, ki jih proizvaja mikrobijska štranka	Prilagojena potreba

Rekombinantni enzim kot sredstvo

Proteaza za odstranitev oznake

Fuzijske oznake so pogosto uporabljene za izboljšanje raztopljivosti in stabilnosti zanimivih rekombinantnih beležin ter jih čeprav poenostavi purifikacijo. Med pogosto uporabljene oznake spadajo His-oznaka, maltazno vezujoči beljak (MBP), glutatijon-S-transferaza (GST) itd.

Tipično se med fuzijsko oznako in zaporedjem ciljne proteine doda povezovalno zaporedje za odstranitev oznake. Odstranitev fuzijskih oznak zahteva lokacijsko specifične proteaze, kot so enterokinaza (EK), trombin, proteaza tabakačne žlebčeve bolezni (TEVp), človeška rinovirska proteaza 3C (HRV3C), mala ubiquitin modificirana beljakina (SUMO) proteaza, tabakačna žileča motnja virusa (TVMV) proteaza in karboxipeptidaza A/B (CPA/CPB).

Vrsta	enzimom	Prepoznavni lokacija
Endoproteaze za odstranitev oznak	Enterokinaza (EK), enteropeptidaza	DDDDK↓
	trombin	LVPR↓GS
	TEV proteaza	ENLYFQ↓G
	HRV3C proteaza	LEVLFQ↓GP
	SUMO proteaza	Tretirska struktura SUMO
	Proteaza TVMV	ETVRFQG↓S
Ekoproteaze za odstranitev oznake	Karboxipeptidaza A (CPA)	C-končne aminokisline, razen Pro, Lys in Arg
Ekoproteaze za odstranitev oznake	Karboxipeptidaza B (CPB)	C-končni Lys in Arg

Drugi proteazi, nukleazi in amidezi

Uporaba	enzimom	Funkcija
Drugi proteazi	Proteaza K	Serinska proteaza, ki razgrdne proteine s hidroliziranjem peptidskih vez.
	IdeS, IgG proteaza	Enzimi, ki razgradijo IgG (Ides), ki sesekajo na določenem mestu imunoglobulina G (IgG), s katerim nastanejo fragmenti Fab in Fc.
	IgA1 proteaza	Proteolitični enzim, ki se seká na določenem mestu v zaporedju hrbtenja človeškega imunoglobulina A1 (IgA1).
Nukleaza	Nukleaza	Seče nukleinske kisline (DNA ali RNA) s hidroliziranjem fosfatdiesterovih vezi.
Nukleaza	Omejitevni enzim	Endonukleaza, ki seče DNA na ali blizu določenih lokacij.
Amidaza	PNGase F	Seča med notranjim N-acetilglukozaminom (GlcNAc) in asparaginskim ostankom visoko mananovih, hibridnih in kompleksnih oligosacharidov.

Yaohai Bio-Pharma ponuja kompleksen CDMO rešitev za rekombinantne enzime

Sklic:

[1] Hennigan JN, Lynch MD. Preteklost, sadašnjost in prihodnost terapij na osnovi enzimov. Drug Discov Today. 2022 Jan;27(1):117-133. doi: 10.1016/j.drudis.2021.09.004.

Vse kategorije

Modalnost