Reagente enzimatico

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Proteasi per la rimozione dei tag

Per migliorare la solubilità e semplificare il processo di purificazione delle proteine ricombinanti, i ricercatori di solito aggiungono tag di fusione, tra cui vengono comunemente utilizzati His-tag, proteina legante il maltosio (MBP) e glutatione-S-transferasi (GST).

Sebbene etichettata come una sequenza extra di proteine, dovrebbe essere rimossa per mantenere l'attività biologica nell'industria farmaceutica. La rimozione dei tag di fusione richiede proteasi sito-specifiche, come enterochinasi (EK), trombina, proteasi del virus dell'incisione del tabacco (TEVp), proteasi 3C del rinovirus umano (HRV3C), proteasi della piccola proteina modificante l'ubiquitina (SUMO), virus della chiazzatura delle vene del tabacco ( TVMV) proteasi e carbossipeptidasi A/B (CPA/CPB).

Tipologia	Enzima	Sito di riconoscimento
Endoproteasi per la rimozione dei tag	Enterochinasi (EK), Enteropeptidasi	DDDDK↓
	trombina	LVPR↓GS
	Proteasi TEV	ENLYFQ↓G
	Proteasi HRV3C	LEVLFQ↓GP
	Proteasi SUMO	Struttura terziaria SUMO
	Proteasi TVMV	ETVRFQG↓S
Esoproteasi per la rimozione dei tag	Carbossipeptidasi A (CPA)	Amminoacidi C-terminali, eccetto Pro, Lys e Arg
Esoproteasi per la rimozione dei tag	Carbossipeptidasi B (CPB)	Terminale C Lys e Arg

Altre proteasi

Applicazioni	Enzima	Funzione
Altre proteasi	Proteasi K	Una serina proteasi che digerisce le proteine idrolizzando i legami peptidici.
	IdeS, proteasi IgG	Enzimi di degradazione delle IgG (Idi) che si scindono in un sito specifico dell'immunoglobulina G (IgG), generando frammenti Fab e Fc
	proteasi IgA1	Un enzima proteolitico che taglia un sito specifico nella sequenza della regione cerniera dell'immunoglobulina umana A1 (IgA1).

Nucleo

Applicazioni	Enzima	Funzione
Nucleo	Nucleo	Scinde gli acidi nucleici (DNA o RNA) idrolizzando i legami fosfodiesteri.
Nucleo	Limitare l'enzima	Un'endonucleasi che scinde il DNA in corrispondenza o in prossimità di siti specifici.

Amidasi

Applicazioni	Enzima	Funzione
Amidasi	PNGase F	Si scinde tra i residui GlcNAc più interni e asparagina di oligosaccaridi ad alto contenuto di mannosio, ibridi e complessi.

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