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Preparazione proteica senza tag

Preparazione proteica senza tag

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Preparazione proteica senza tag

I tag proteici, come partner di fusione utilizzati nelle tecnologie del DNA ricombinante, consentono un'efficace purificazione di affinità in un unico passaggio per varie proteine/peptidi con caratteristiche diverse. Nonostante questo importante vantaggio, i tag degli amminoacidi esogeni possono alterare la struttura proteica e le funzioni biologiche. Pertanto, proteine ​​o peptidi non marcati (privi di tag) sono maggiormente preferiti per garantire sicurezza ed efficacia, soprattutto nel campo biofarmaceutico. Una proteina ricombinante con un tag di fusione ha possibilità limitate di ottenere l'autorizzazione da parte di agenzie mediche/di somministrazione di farmaci.

Basandosi sulla piattaforma di ricerca e sviluppo di prodotti biologici microbici, Yaohai Bio-Pharma offre servizi personalizzati di preparazione di proteine ​​senza tag (senza tag) dedicati a soddisfare obiettivi unici di ricerca, sviluppo e produzione per uso clinico.

Parole chiave: produzione di proteine ​​senza tag, purificazione di proteine ​​senza tag, preparazione di proteine ​​basata su tag liberi, espressione e purificazione di proteine ​​senza tag, proteina bersaglio altamente priva di tag 

Applicazione: ricerca sulla medicina umana, sviluppo della medicina animale, sviluppo di vaccini ricombinanti, produzione di prodotti biologici ricombinanti di grandi molecole

La nostra piattaforma di ricerca e sviluppo microbico

Abbiamo esperienza nell'ingegneria dei ceppi microbici, nella fermentazione e nella purificazione dei prodotti.

batteri: Escherichia coli (E. coli)

Lievito: Pichia pastoris (P. pastoris), Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae), Hansenula polymorpha (H. polymorpha)

Opzioni personalizzate
Modalità Proteine ​​Ricombinanti
Materiali di partenza Sequenze genetiche, plasmidi ricombinanti o ceppi ingegnerizzati
Risultati finali Purificazione: >80%, >85%, >90% Quantità: 0.2~10 g (da determinare in base al progetto)
Sistema di espressione e formazione

E. coli secrezione periplasmatica, espressione di corpi solubili e inclusi;

Espressione intracellulare o di secrezione del lievito

Metodi di analisi Ultravioletto (UV), dosaggio dell'acido bicinconinico (BCA), Bradford o Lowry per quantità
Elettroforesi su gel di poliacrilammide con sodio dodecil-solfato (SDS-PAGE) per test di purificazione
Opzionale: Western blot (WB), test di immunoassorbimento enzimatico (ELISA), cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC)
Impurità residue Endotossina (opzionale)
i dettagli del servizio

Servizi

i dettagli del servizio

Tempistica minima (giorno lavorativo)

Sintesi genica

Ottimizzazione del codone per host di espressioni specifiche

7 ~ 10 giorni

Sintesi genica

Costruzione di plasmidi/vettori

Clonazione in plasmide/vettore

2 giorni

Trasformazione plasmidica

Verifica della reazione a catena della polimerasi (PCR), digestione con enzimi di restrizione, sequenziamento genico

3 giorni

Espressione proteica in E. coli

Trasformazione plasmidica,

2 giorni

Coltivazione in agitazione

3 giorni

Fermentazione in sacchi da 7 litri, ottimizzazione

4 giorni/lotto

Purificazione delle proteine ​​senza tag, ottimizzazione

5~10 giorni/lotto

Test mediante elettroforesi su gel di poliacrilammide con sodio dodecil-solfato (SDS-PAGE)

Espressione delle proteine ​​nel lievito

Preparazione delle cellule competenti del lievito

4 giorni

Linearizzazione ed elettrotrasformazione dei plasmidi

Fermentazione in sacchi da 7 litri, ottimizzazione

5 giorni

Purificazione delle proteine ​​senza tag, ottimizzazione

7 giorni/lotto

Purificazione delle proteine ​​senza tag

5~10 giorni/lotto

Controllo qualità tramite SDS-PAGE

Servizi aggiuntivi (facoltativi)
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