Sintesi su misura di circRNA

RNA IVT

Sintesi su misura di circRNA

Il mRNA circolare (circRNA) è stato ampiamente utilizzato nello studio delle funzioni di geni o proteine. Allo stesso tempo, è popolare nello sviluppo di biologici profilattici e terapeutici, simili al mRNA.

Yaohai Bio-Pharma ha sviluppato un insieme di tecnologie di sintesi di circRNA per fornire RNA di alta qualità, come il progetto e l'ottimizzazione delle sequenze, la trascrizione in vitro (IVT), la circularizzazione, la purificazione e l'incapsulamento in nanoparticelle lipidiche (LNP). Tutti i prodotti vengono rilasciati secondo standard rigorosi di controllo della qualità (QC).

Applicazioni di CircRNA

In confronto all'mRNA lineare, l'RNA circolare (circRNA) è più stabile a livello strutturale e rappresenta un principale punto caldo della ricerca attuale sui farmaci acidi nucleici. Ha un ampio spettro di applicazioni in vari campi, sia come circRNA codificante che non codificante, inclusi vaccini preventivi per malattie infettive, vaccini oncologici terapeutici, farmaci oncologici terapeutici, terapia di sostituzione proteica, medicina rigenerativa, terapia cellulare e genica (CGT), ruolo di spugna molecolare ed aptameri RNA.

Dettagli del servizio

Processo	Servizio Opzionale	Dettagli del servizio	Periodo di Consegna (giorni)
progettazione e Ottimizzazione della Sequenza circRNA	Progettazione e ottimizzazione delle sequenze codificanti	Ottimizzazione del codone CDS	1
progettazione e Ottimizzazione della Sequenza circRNA	Progettazione e ottimizzazione di sequenze non codificanti	Progettazione e Ottimizzazione delle Sequenze degli Intron e degli Esone, Braccia Omolette e Spaziatori	1-2
Preparazione del Plasmide Circolare	Sintesi genica	Sintesi di Gene (Terze parti)	7-10
	Amplificazione del Plasmide	Amplificazione del Plasmide	2
	Amplificazione del Plasmide	Estrazione del Plasmide	2
Preparazione di Plasmidi Lineari	Linearizzazione e purificazione di plasmidi	Linearizzazione del plasmide	1
Preparazione di Plasmidi Lineari	Linearizzazione e purificazione di plasmidi	Purificazione del DNA Linearizzato	1
Trascrizione in Vitro e Ciclizzazione	Trascrizione in Vitro e Ciclizzazione	Reazioni di Trascrizione in Vitro e Ciclizzazione	1-2
	Trascrizione in Vitro e Ciclizzazione	Digestione con RNase R	1-2
	Ottimizzazione-opzionale	Composizione della Reazione, Ottimizzazione del Tempo	2-5
purificazione del circRNA	Metodo Convenzionale di Purificazione	Precipitazione con cloruro di litio	1
	Metodo Convenzionale di Purificazione	Purificazione con paramagnetici	1
	Purificazione di circRNA Altamente Puro	Cromatografia Liquida ad Alta Prestazione (HPLC) Preparativa	1-2
	Scambio di tampone	Ultrafiltrazione	1
liofilizzazione del circRNA	Riempimento del Campione	Riempimento	2-3
	Liofilizzazione	Precongelamento
		Essicazione primaria (sottrazione)
		Essicazione secondaria (disassorbimento)
incapsulazione circRNA-LNP	Incapsulamento LNP	Pretreatment del Materiale e del Liquido	2
	Incapsulamento LNP	Mescolamento con Dispositivo Microfluico	2
	Scambio di tampone	Filtrazione a Flusso Tangenziale	1
	Sterilizzato	Filtrazione	1
Controllo della Qualità del DNA Plasmidico	Concentrazione/purità	Spettrofotometria Ultravioletta (UV)	1-2
	Conformazione del Plasmide	Elettroforesi su Gel di Agarosio (AGE)
	Conformazione del Plasmide	Elettroforesi Capillare (CE)-Opzionale
	Identificazione del Plasmide	Identificazione dell'Enzima di Ristrizione/AGE
Controllo qualità del circRNA	Concentrazione/purità	Spettrofotometria Ultravioletta (UV)	-
	Purezza	Elettroforesi su Gel di Agarosio (AGE)/E-Gel	0.5
	Purezza	HPLC-opzionale	1
Controllo di Qualità del circRNA-LNP	Efficienza di incapsulamento	Metodo RiboGreen	1
	Dimensione delle Particelle	Dispersione di Luce Dinamica (DLS)	1
	Indice di Polidispersione	Dispersione di Luce Dinamica (DLS)	1
	Potenziale Zeta	Dispersione di Luce Dinamica (DLS)	1
Analisi della Potenza a Base Cellulare	Trasfezione cellulare	Imbracatura cellulare, trasfezione cellulare	4
Analisi della Potenza a Base Cellulare	Rilevazione della Proteina Obiettivo	Osservazione al fluorescenza, Western Blot/ELISA	1-3

Studio di caso

Abbiamo trasfettato nelle cellule 293T l'RNR circolare del proteina fluorescente verde migliorata (eGFP circRNA), l'RNR circolare mCherry, e l'RNR circolare luciferasi, e abbiamo rilevato la proteina obiettivo attraverso segnali fluorescenti, luminescenti o cromatici, western blot (WB), test enzimatico immunoassay (ELISA).

Analisi della Potenza a Base Cellulare dei Campioni circRNA da Yaohai Bio-Pharma

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