L'importanza dello screening della tensione
Lo screening degli ospiti idonei è necessario per lo sviluppo della CMC biologica, che determina la qualità e la coerenza del prodotto e del processo di produzione. L'obiettivo diretto dello screening dell'ospite è fornire una banca cellulare primaria (PCB) candidata, con elevati livelli di espressione ed elevata stabilità sia in termini di stabilità di passaggio che di stabilità di conservazione. La selezione dell’ospite idoneo è necessaria per due ragioni principali:
- Innanzitutto, selezionare l'ospite microbico con un alto livello di espressione. Esistono diversi ceppi disponibili in commercio, che vengono utilizzati per esprimere diversi tipi di proteine, come proteine tossiche, proteine solubili o proteine eucariotiche.
- In secondo luogo, per verificare la stabilità genetica dell'ospite. I test di stabilità genetica sono un punto chiave durante tutto il ciclo di vita della produzione. Si suggerisce che l'elevata stabilità genetica sia riconosciuta come un'altra caratteristica chiave per un ceppo adatto.
Parole chiave: selezione di ceppi microbici, screening di ceppi microbici, screening ad alta produttività di batteri o lieviti, screening di ceppi ad alta produzione, screening di ceppi altamente stabili, screening di ceppi geneticamente stabili Applicazione: medicina umana, medicina animale, vaccino, biologia sintetica, grande molecola ricombinante prodotti biologici, reagente biologico
Servizi di screening dei ceppi di Yaohai Bio-Pharma
Beneficiando di oltre 10 anni di esperienza di CDMO nei prodotti biologici microbici, supportiamo lo sviluppo e la produzione di varie molecole di grandi dimensioni, inclusi vaccini a subunità ricombinanti, particelle virus-simili (VLP), ormoni (insulina, GLP-1, ormone della crescita), citochine ( Interleuchina-2/IL-2, IL-15, IL-21), fattori di crescita (EGF, FGF, NGF), nanocorpi/anticorpi a dominio singolo (sdAbs), enzimi, ecc.
Abbiamo accumulato una ricca esperienza nella selezione di vari tipi di vettori plasmidici e ospiti microbici, compresi i batteri Escherichia coli (Escherichia coli), e lievito Pichia pastoris (P. pastoris), Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae), Hansenula polymorpha (H. polymorpha). Possiamo trovare il miglior sistema di espressione per i tuoi prodotti biologici unici.
Abbiamo raccolto vari ospiti microbici con fonti chiare e CoA standard, inclusi E.coli espressione ed espressione del lievito.
i dettagli del servizio
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Servizi
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i dettagli del servizio
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Timeline/giorno minimo
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Risultati finali
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Costruzione del ceppo (E. coli)
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Trasformazione plasmidica (multi-host)
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5
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COA degli host commerciali Rapporto sulla costruzione del ceppo
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Verifica PCR
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Purificazione del ceppo
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Conservazione del ceppo
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Costruzione del ceppo (lievito)
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Preparazione di cellule di lievito competenti
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10
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Linearizzazione dei plasmidi
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Trasformazione elettrica
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Screening di resistenze/carenze nutrizionali
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Purificazione del ceppo
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Conservazione del ceppo
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Screening dell'ospite adatto
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Estrazione del DNA plasmidico o genomico
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15-20
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Processo di screening dell'ospiteCOA di ceppi ingegnerizzati
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Verifica PCR, digestione con enzimi di restrizione
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Sequenziamento del gene bersaglio
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Screening di host ad alta espressione
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Screening di ospiti con stabilità genetica
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Conservazione del ceppo
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Caso di studio
Un ospite adatto migliora il livello di espressione proteica di 2.5 volte.
Siamo incaricati di sviluppare prodotti ad alta produzione E. coli sottoporre a tensione. E abbiamo provato tre tipi di spot pubblicitari E. coli ospiti, in base alle caratteristiche della proteina bersaglio. È stato dimostrato che il ceppo S1-1 e S1-2 (Fig A: Corsia 1,2) ha migliorato il livello proteico fino a 3.5 volte rispetto al ceppo iniziale del cliente (Fig A: Corsia 3).
Inoltre, il ceppo S1-1 ha ottenuto un'elevata stabilità genetica (Fig B) ed è stato riconosciuto come ceppo candidato per la banca cellulare primaria (PCB).
Le nostre caratteristiche di servizio
Esperienza dimostrata con vari ospiti microbici, ad es. E. coli DH5α, TOP10, Trans10, BL21; P. pastoris SMD1168H, X-33, GS115, PichiaRosa ceppo1/2/3/4; S. cerevisiae e H. polimorfo.
Abbiamo esperienza con E. coli secrezione periplasmatica, espressione di corpi solubili e inclusi, nonché espressione intracellulare o di secrezione di lievito. Non aggiungiamo antibiotici o aggiungiamo gli antibiotici sotto guida normativa.
Creiamo una piattaforma di screening ad alta produttività per selezionare ceppi stabili e ad alta produzione da oltre cento ceppi candidati.
È garantito che il processo di ingegneria e screening dei ceppi sia tracciabile, secondo la Good Data and Record Management.
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