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Screening del Ceppo

Screening del Ceppo

L'Importanza del Screening di Ceppi

La selezione di host adatti è necessaria per lo sviluppo CMC dei biologici, il che determina la qualità e la coerenza del prodotto e del processo produttivo. L'obiettivo diretto dello screening dell'host è fornire un banco primario di cellule candidato (PCB) con alti livelli di espressione e alta stabilità sia in termini di stabilità delle passaggi che di stabilità durante l'archiviazione. La selezione di un host adatto è necessaria per due motivi principali:

- Primo, selezionare l'ospite microbico con un alto livello di espressione. Esistono molte ceppi commercialmente disponibili utilizzati per esprimere diversi tipi di proteine, come proteine tossiche, proteine solubili o proteine eucariotiche.

- In secondo luogo, selezionare l'ospite con stabilità genetica. Il test di stabilità genetica è un punto chiave durante tutto il ciclo di vita della produzione. Si suggerisce che una alta stabilità genetica venga riconosciuta come un'altra caratteristica chiave per un ceppo adatto.

Parole chiave: selezione di ceppi microbici, screening di ceppi microbici, screening ad alta velocità di batteri o lieviti, screening di ceppi ad alta produzione, screening di ceppi altamente stabili, screening di ceppi geneticamente stabili Applicazione: medicina umana, medicina veterinaria, vaccini, biologia sintetica, biologici a grande molecola ricombinanti, reagenti biologici

Servizi di Screening dei Ceppi di Yaohai Bio-Pharma

Grazie a più di 10 anni di esperienza in CDMO nella biologia microbica, supportiamo lo sviluppo e la produzione di varie molecole di grandi dimensioni, inclusi vaccini ricombinanti a sottounita', particelle simili a virus (VLP), ormoni (insulina, GLP-1, ormone della crescita), citochine (Interleuchina-2/IL-2, IL-15, IL-21), fattori di crescita (EGF, FGF, NGF), nanocorpi/anticorpi a singolo dominio (sdAbs), enzimi, ecc.

Abbiamo accumulato una vasta esperienza nella selezione di vari tipi di vettori plasmidici e di ospiti microbici, inclusi i batteri Escherichia coli (E. coli), e lievito Pichia pastoris (P. pastoris), Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae), Hansenula polymorfa (H. polymorpha). Possiamo trovare il miglior sistema di espressione per i tuoi biologici unici.

Abbiamo raccolto vari ospiti microbici con fonti chiare e CoA standard, inclusi E.Coli espressione batterica ed espressione lievitica.

Dettagli del servizio

Servizi

Dettagli del servizio

Minimo tempo di esecuzione/Giorno

Consegne

Costruzione del ceppo (E. coli)

Trasformazione plasmidica (multi-ospiti)

5

COA degli ospiti commerciali Rapporto di costruzione del ceppo

Verifica con PCR

Purificazione del ceppo

Conservazione del ceppo

Costruzione del ceppo (Lievitazione)

Preparazione di cellule lievitanti competenti

10

Linearizzazione del plasmide

Elettrotrasformazione

Screening della resistenza\/deficienza nutrizionale

Purificazione del ceppo

Conservazione del ceppo

Screening del ceppo ospite adatto

Estrazione di DNA plasmidico o genomico

15-20

Processo di screening dell'ospite COA delle ceppe ingegnerizzate

Verifica PCR, digestione con enzimi di restrizione

Sequencing del Gene Obiettivo

Screening degli ospiti ad alta espressione

Screening degli ospiti con stabilità genetica

Conservazione del ceppo

Studio di caso
Un ospite adatto aumenta il livello di espressione proteica di 2,5 volte.

Siamo stati incaricati di sviluppare un ceppo ad alto rendimento E. coli e abbiamo provato tre tipi di ospiti commerciali E. coli in base alle caratteristiche della proteina target. È stato dimostrato che i ceppi S1-1 e S1-2 (Fig A: Lane 1,2) hanno migliorato il livello di proteina di 3,5 volte rispetto al ceppo iniziale del cliente (Fig A: Lane 3).

Inoltre, il ceppo S1-1 ha mostrato una grande stabilità genetica (Fig B), ed è stato riconosciuto come ceppo candidato per la banca primaria delle cellule (PCB).

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Le Caratteristiche del Nostro Servizio

Competenza dimostrata con vari ospiti microbici, ad esempio, E. coli DH5α, TOP10, Trans10, BL21; P. pastoris SMD1168H, X-33, GS115, PichiaPink strain1/2/3/4; S. cerevisiae e H. polymorpha .

Siamo esperti in E. coli secrezione periplasmatica, espressione solubile e corpo di inclusione, nonché espressione intracellulare o di secrezione in lieviti. Non aggiungiamo antibiotici oppure li aggiungiamo sotto la guida normativa.

Stabiliamo una piattaforma di screening ad alta velocità per selezionare ceppi ad alta produzione e stabili tra più di cento ceppi candidati.

Si garantisce che il processo di ingegneria del ceppo e screening sia tracciabile, in conformità con le buone pratiche di gestione dei dati e dei record.

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