La deamidazione delle catene laterali di glutammato e asparagina è una modifica comune in termini di impatto sulle proprietà dei biofarmaci proteici. La deamidazione può verificarsi nei residui di glutamine, ma di solito a un ritmo molto più basso. I tassi di deamidazione sono influenzati dalla temperatura, dal pH, dalla struttura locale della proteina e dai residui amminoacilici adiacenti.
Yaohai BioPharma offre un servizio di test sulla deamidazione degli aminoacidi, che consente di rilevare la deamidazione degli aminoacidi tramite Cromatografia Liquida-Spettrometria di Massa (LC-MS).
Siamo stati coinvolti nella Caratterizzazione Strutturale delle Proteine di vari grandi molecole, inclusi Vaccini Ricombinanti a Sottounita', Nanocorpi/VHHs/Corpi Antigenici Monodomio (sdAbs), Frammenti di Antibodi, Ormoni/Peptidi, Cytokine, Fattori di Crescita (CF), Enzimi, Collagene, ecc.
Requisiti Regolatori per la Deamidazione degli Aminoacidi
Secondo le linee guida ICH Q6B, le forme deamidate possono essere rilevate e caratterizzate mediante metodi analitici cromatografici, elettroforetici e/o altri pertinenti.
Metodi Analitici
| Analisi |
Metodi |
| Deamidazione |
Cromatografia a Fase Liquida-Coupled Spettrometria di Massa (LC-MS) |
Procedure
ad esempio, deamidazione aspartica
1. Digestione enzimatica
2. LC-MS sotto condizioni di Cromatografia Liquida ad Alta Prestazione (HPLC)
3. Analisi dei dati
La deamidazione dell'asparagina avviene attraverso un intermediato succinimide (Suc), che è suscettibile a razemizzazione e idrolisi, producendo quattro isomeri di Asp, inclusi L-Asp, L-IsoAsp, D-Asp e D-IsoAsp.
In teoria, la deamidazione della Gln potrebbe generare quattro corrispondenti isomeri di Glu attraverso un processo simile alla deamidazione dell'Asn.
La spettrometria di massa ad alta risoluzione identifica facilmente la differenza di massa di 1 Da tra i peptidi contenenti Asn/Gln e i loro corrispondenti omologhi deamidati Asp/Glu.
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