La profilazione degli N-glicani è essenziale per la produzione di prodotti biofarmaceutici. Yaohai Bio-Pharma fornisce un servizio di profilazione degli N-glicani utilizzando la cromatografia liquida-spettrometria di massa (LC-MS) dei glicani rilasciati ed etichettati. Le fasi generali per la preparazione del campione di N-glicani comprendono la digestione della glicoproteina (GP), la deglicosilazione, la purificazione, l'etichettatura/derivatizzazione e l'estrazione in fase solida (SPE).
Siamo stati coinvolti nella caratterizzazione strutturale proteica di varie molecole di grandi dimensioni, inclusi vaccini con subunità ricombinanti, nanocorpi/VHH/anticorpi a dominio singolo (sdAb), frammenti di anticorpi, ormoni/peptidi, citochine, fattori di crescita (GF), enzimi, collageni, eccetera.
Requisiti normativi per la profilazione degli N-glicani
Secondo la linea guida ICH Q6B, “per le glicoproteine, viene determinato il contenuto di carboidrati (zuccheri neutri, aminozuccheri e acidi sialici). Inoltre, vengono analizzati, per quanto possibile, la struttura delle catene di carboidrati, il modello degli oligosaccaridi (profilo antennario) e i siti di glicosilazione della catena polipeptidica.
Metodo analitico
| Analisi |
Metodi |
| Profilazione degli N-glicani |
Analisi mediante cromatografia liquida-spettrometria di massa (LC-MS) dei glicani rilasciati ed etichettati |
Procedure
1. Rilascio enzimatico di glicani con il peptide N-glicosidasi F (PNGase F)
2. Derivatizzazione dei glicani rilasciati mediante 2-aminobenzamide (2-AB)
3. Purificazione degli N-glicani raccolti su una colonna TSK Amide - 80 se sono presenti grandi quantità di detergenti, sali non volatili o materiali con gruppi amminici liberi
4. Etichettatura mediante 2-aminobenzamide fluorescente (2-AB)
5. Analisi LC-MS di N-glicani marcati
6. Analisi dei dati
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