Sintesi personalizzata di saRNA
L'mRNA autoamplificante (saRNA), noto anche come RNA replicone, codifica sequenze di mRNA di trascrizione in vitro (IVT) e geni di replicasi virale derivati da alfavirus o flavivirus. I geni della replicasi virale consentono l'autoamplificazione dell'mRNA, che si traduce in una maggiore espressione proteica e in una dose minima richiesta di RNA rispetto agli mRNA non amplificanti. Un altro aspetto è che il saRNA è una molecola relativamente grande (più di 14 kb).
Yaohai Bio-Pharma ha creato una serie di tecnologie di sintesi dell'mRNA per fornire mRNA non amplificante e mRNA autoamplificante (1000 nt~14000 nt), come progettazione e ottimizzazione di sequenze, IVT, purificazione, liofilizzazione e incapsulamento di nanoparticelle lipidiche (LNP) . Tutti i prodotti sono rilasciati secondo rigorosi standard di controllo qualità.
Fig.1 Caratteristiche strutturali degli mRNA IVT: mRNA convenzionale, circolare e autoamplificante.
Caratteristiche della sequenza dell'mRNA autoamplificante
L'RNA autoamplificante comprende quattro proteine non strutturali (designate come nsP1, nsP2, nsP3 e nsP4), che derivano dagli alfavirus, il virus dell'encefalite equina venezuelana (VEEV). Tra questi, nsP1 mostra duplici attività enzimatiche, vale a dire GTasi e N7MTasi, mentre nsP2 possiede attività RTPasi, fondamentale per tappare l'mRNA IVT per generare la struttura Cap 0. Inoltre, nsP2 funge da proteasi ed elicasi, facilitando l'intricata elaborazione dell'intero complesso nsP. La funzione precisa di nsP3 rimane sfuggente, ma si impegna in interazioni con diverse proteine della cellula ospite, contribuendo così all'attenuazione della risposta antivirale montata dall'ospite.
Una regione del promotore subgenomico (SGP) dell'alfavirus si trova prima del gene di interesse (GOI). L'elemento SGP facilita l'inizio della trascrizione del GOI bypassando la lettura della sequenza che codifica per le proteine virali nsP.
Fig.2 Sintesi e saggi cellulari del saRNA eGFP della piattaforma RNASci di Yaohai Bio-Pharma.
Soluzioni personalizzate di saRNA
Il protocollo di sintesi del saRNA è simile all'mRNA: Sintesi personalizzata di mRNA
- Progettazione della sequenza
- Preparazione del modello plasmidico
- trascrizione in vitro (IVT)
- Tappatura enzimatica dell'mRNA
- Tappatura della co-trascrizione dell'mRNA
- Purificazione dell'mRNA
- Liofilizzazione dell'mRNA
- Incapsulamento LNP
- Analisi e test
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
