Nel processo di preparazione dell'mRNA trascritto in vitro (IVT), è necessario un DNA plasmidico linearizzato come template per la trascrizione IVT con l'aiuto della polimerasi RNA T7. Un DNA plasmidico di alta qualità è fondamentale per la trascrizione in vitro.
Basandosi sulla piattaforma di servizio matura per la preparazione dei plasmidi, Yaohai Bio-Pharma può offrire un servizio di preparazione di DNA plasmidico linearizzato di alta purezza e alto standard per ottenere una trascrizione IVT efficiente.
Dettagli dei Servizi
| Processo |
Servizio Opzionale |
Dettagli del servizio |
Periodo di consegna (giornata lavorativa) |
| Preparazione del Plasmide Circolare |
Sintesi genica |
Sintesi di Gene (Terze parti) |
7-10 |
| Amplificazione del Plasmide |
Amplificazione del Plasmide |
2 |
| Estrazione del Plasmide |
| Preparazione di Plasmidi Lineari |
Linearizzazione e purificazione di plasmidi |
Linearizzazione del plasmide |
1 |
| Purificazione del DNA Linearizzato |
| Controllo qualità del DNA plasmidiale |
Concentrazione e purezza |
Spettrofotometria Ultravioletta (UV) |
1-2 |
| Conformazione del Plasmide |
Elettroforesi su Gel di Agarosio (AGE) |
| Elettroforesi Capillare (CE)-Opzionale |
| Identificazione del Plasmide |
Identificazione dell'enzima di restrizione / AGE |
Le nostre caratteristiche
- Template Plasmide Freecut
Selezione flessibile dei metodi di linearizzazione
- Alta percentuale di recupero
Ottimizzazione dei metodi di estrazione e purificazione del DNA per ottenere alte percentuali di recupero.
- Controllo Qualità Stringente
Standard rigorosi di controllo del processo, con una percentuale di conformazione sovraspirale dei campioni plasmidici per la ricerca superiore al 80%.
- Piattaforma Processuale Matura
Servizi di preparazione e controllo della qualità dei plasmidi ad alto standard ed efficienza per soddisfare i bisogni sperimentali.
Studio di caso
Prendendo come esempio il prodotto mRNA_luciferase del catalogo Yaohai Bio-Pharma, il campione plasmidico del template di trascrizione (grado di ricerca) ha un rapporto sovraspirale superiore al 90%, un rapporto di linearizzazione vicino al 100%, e un rapporto di trascrizione successiva fino a 1:200 (DNA plasmidico linearizzato:mRNA).
L'mRNA_luciferasi ottenuto attraverso la preparazione di un plasmide linearizzato come template viene trasfettato in cellule 293T e l'attività della reazione enzima-sostanza è valutata 24 ore dopo la trasfessione.
Può essere rilevato un segnale di attività di luciferasi forte e evidente, ovvero la proteina luciferasi viene espressa in modo efficiente, il che suggerisce che la purezza del template di trascrizione può soddisfare pienamente il requisito di preparazione di mRNA di alta qualità.
Analisi della Rapportazione del Plasmide Sovraccorrisposto
Validazione dell'espressione di mRNA di luciferasi In Vitro
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