La preparazione del CircRNA richiede RNA lineare come materiale precursore (precursore dell'RNA) per la ciclizzazione, dove il precursore dell'RNA viene solitamente preparato utilizzando DNA plasmidico linearizzato come modello di trascrizione e trascritto in vitro con l'aiuto della RNA polimerasi T7.
Il DNA plasmidico di alta qualità è essenziale per la trascrizione in vitro (IVT). Basandosi sulla piattaforma di servizi di preparazione di plasmidi matura, Yaohai Bio-Pharma è in grado di fornire un servizio di preparazione di DNA plasmidico linearizzato (pDNA) ad elevata purezza e standard per garantire l'integrità dei prodotti IVT.
Dettagli sui servizi
| Processo | Servizio opzionale | i dettagli del servizio | Periodo di consegna (giorni lavorativi) |
| Preparazione del plasmide circolare | Sintesi genica | Sintesi genica (di terze parti) | 7-10 |
| Amplificazione plasmidica | Amplificazione plasmidica | 2 |
| Estrazione del plasmide |
| Preparazione del plasmide linearizzato | Linearizzazione e purificazione dei plasmidi | Linearizzazione dei plasmidi | 1 |
| Linearizzazione Purificazione del DNA |
| Controllo di qualità del DNA plasmidico | Purezza della concentrazione | Spettrofotometria ultravioletta (UV). | 1-2 |
| Conformazione plasmidica | Elettroforesi su gel di agarosio (AGE) |
| Elettroforesi capillare (CE)-opzionale |
| Identificazione del plasmide | Identificazione degli enzimi di restrizione/AGE |
Le nostre caratteristiche
- Plasmide modello ritagliabile
Selezione flessibile dei metodi di linearizzazione
Ottimizzazione dei metodi di estrazione e purificazione del DNA per ottenere tassi di recupero elevati.
- Controllo di qualità rigoroso
Standard rigorosi di controllo del processo, con un tasso di conformazione superelicoidale dei campioni di plasmidi per la ricerca superiore all'80%.
- Processo di piattaforma matura
Servizi di preparazione e controllo qualità di plasmidi di alto livello e ad alta efficienza per soddisfare le esigenze sperimentali.
Caso di studio
Prendendo come esempio il prodotto mCherry circRNA di Yaohai Bio-Pharma, il rapporto superavvolto dei campioni di plasmidi modello di trascrizione (grado di ricerca) è superiore al 70%, con un tasso di linearizzazione vicino al 100%.
Il circRNA mCherry viene preparato con un plasmide linearizzato come modello e trasfettato in cellule 293T. Un alto livello di espressione di fluorescenza (fluorescenza rossa) viene rilevato dopo 24 ore dalla trasfezione, che verrà migliorato dopo 48 ore e può ancora essere rilevato il 7° giorno e il 14° giorno dopo la trasfezione.
La proteina mCherry è espressa in modo stabile ed efficiente e la purezza del modello trascrizionale può soddisfare i requisiti del prodotto farmaceutico circRNA (DP) con alta qualità.
Convalida dell'espressione in vitro del circRNA di mCherry
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