La preparazione di circRNA richiede RNA lineare come materiale precursore (RNA precursore) per la ciclizzazione, dove l'RNA precursore viene generalmente preparato utilizzando DNA plasmidico linearizzato come template di trascrizione e trascritto in vitro con l'aiuto della polimerasi T7 RNA.
Un DNA plasmidico di alta qualità è essenziale per la trascrizione in vitro (IVT). Basandosi sulla piattaforma di servizio di preparazione plasmidica matura, Yaohai Bio-Pharma può fornire un servizio di preparazione di DNA plasmidico linearizzato ad alta purezza e standard per garantire l'integrità dei prodotti IVT.
Dettagli dei Servizi
| Processo |
Servizio Opzionale |
Dettagli del servizio |
Periodo di consegna (giornata lavorativa) |
| Preparazione del Plasmide Circolare |
Sintesi genica |
Sintesi di Gene (Terze parti) |
7-10 |
| Amplificazione del Plasmide |
Amplificazione del Plasmide |
2 |
| Estrazione del Plasmide |
| Preparazione di Plasmidi Lineari |
Linearizzazione e purificazione di plasmidi |
Linearizzazione del plasmide |
1 |
| Purificazione del DNA Linearizzato |
| Controllo qualità del DNA plasmidiale |
Concentrazione e purezza |
Spettrofotometria Ultravioletta (UV) |
1-2 |
| Conformazione del Plasmide |
Elettroforesi su Gel di Agarosio (AGE) |
| Elettroforesi Capillare (CE)-Opzionale |
| Identificazione del Plasmide |
Identificazione dell'enzima di restrizione / AGE |
Le nostre caratteristiche
- Template Plasmide Freecut
Selezione flessibile dei metodi di linearizzazione
- Alta percentuale di recupero
Ottimizzazione dei metodi di estrazione e purificazione del DNA per ottenere alte percentuali di recupero.
- Controllo Qualità Stringente
Standard rigorosi di controllo del processo, con una percentuale di conformazione sovraspirale dei campioni plasmidici per la ricerca superiore al 80%.
- Piattaforma Processuale Matura
Servizi di preparazione e controllo della qualità dei plasmidi ad alto standard ed efficienza per soddisfare i bisogni sperimentali.
Studio di caso
Prendendo come esempio il prodotto mCherry circRNA di Yaohai Bio-Pharma, il rapporto sovraspirale dei campioni di plasmidi template di trascrizione (grado di ricerca) è superiore al 70%, con un tasso di linearizzazione vicino al 100%.
il circRNA mCherry viene preparato utilizzando un plasmide linearizzato come template e trasfettato in cellule 293T. Viene rilevato un alto livello di espressione di fluorescenza (fluorescenza rossa) dopo 24 ore dalla trasfessione, che si intensificherà dopo 48 ore e sarà ancora rilevabile il settimo giorno e il quattordicesimo giorno dopo la trasfessione.
la proteina mCherry viene espressa in modo stabile ed efficiente, e la purezza del template trascrizionale può soddisfare i requisiti del prodotto farmaceutico circRNA (DP) di alta qualità.
Validazione dell'espressione in vitro del circRNA mCherry
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