Saggi di potenza basati su cellule
Il significato del test di potenza dell'mRNA
Con il rapido sviluppo di vaccini e terapie a base di mRNA, è necessario un pannello specifico di metodi di analisi per testare la potenza (definendo la loro attività biologica), coinvolgendo l'efficienza traslazionale dell'mRNA. Questi metodi si basano tipicamente sulla trasfezione cellulare e su analisi funzionali della proteina bersaglio.
Yaohai Bio-Pharma offre test di potenza basati su cellule per sostanze farmaceutiche mRNA o prodotti LNP, tra cui la trasfezione cellulare (cellule 293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7, ecc.) e test ELISA o Western Blotting (WB).
Requisiti normativi per i test di potenza
Secondo le considerazioni normative dell’OMS, “La potenza di ciascun lotto del vaccino finale dovrebbe essere determinata utilizzando uno o più metodi funzionali adeguatamente quantitativi e validati. I potenziali test di potenza in vitro possono includere sistemi di trasfezione basati su cellule o test senza cellule”. E l'USP ha raccomandato un “test cellulare” per testare la potenza dell'mRNA, cioè l'espressione della proteina bersaglio.
Metodo analitico
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Analisi
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Metodi
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Saggi di potenza
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La trasfezione cellulare e la proteina bersaglio identificano:
Celle 293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7, ecc.
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Procedura
Passaggio 1. Trasfezione cellulare con mRNA o mRNA-LNP
Le cellule vengono coltivate e trasfettate con mRNA o mRNA-LNP. Nel dettaglio, l'mRNA viene trasfettato dopo essere stato miscelato con un reagente di trasfezione, mentre l'mRNA-LNP viene trasfettato direttamente nelle cellule. Dopo 24-48 ore, chiarificare il surnatante contenente la proteina espressa mediante centrifugazione.
Passaggio 2. Saggi funzionali della proteina bersaglio
Eseguire test ELISA o WB per valutare il legame funzionale delle proteine bersaglio.
Argomento di studio
Saggi di potenza basati su cellule di campioni di mRNA
Yaohai-BioPharma ha sviluppato un metodo di analisi della potenza cellulare per l'mRNA, che prevede la coltura cellulare, la trasfezione cellulare e analisi funzionali delle proteine. Abbiamo trasfettato l'mRNA di eGFP, l'mRNA di mCherry, l'mRNA della luciferasi, l'mRNA della proteina spike in cellule 293T e rilevato la proteina bersaglio attraverso fluorescenza, segnale luminescente o colorato, WB, ELISA.
Saggi di potenza basati su cellule di prodotti mRNA di Yaohai Bio-Pharma
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