Test di Potenza a Base Cellulare
L'Importanza del Test di Potenza mRNA
Con lo sviluppo rapido dei vaccini e delle terapie mRNA, è necessario un particolare pannello di metodi di analisi per testare la potenza (definendo la loro attività biologica), che coinvolge l'efficienza della traduzione dell'mRNA. Questi metodi sono generalmente basati sulla trasfazione cellulare e sui test funzionali della proteina bersaglio.
Yaohai Bio-Pharma offre test di potenza a base cellulare per sostanze farmaceutiche mRNA o prodotti LNP, inclusa la trasfazione cellulare (cellule 293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7, ecc.) e test ELISA o Western Blotting (WB).
Requisiti Regolatori per i Test di Potenza
Secondo le considerazioni normative dell'OMS, "La potenza di ogni lotto del vaccino finale dovrebbe essere determinata utilizzando metodi funzionali quantitativi e validati. I potenziali test in vitro per la potenza possono includere sistemi di trasfertizione basati su cellule o test senza cellule." E la USP ha consigliato un "test basato su cellule" per verificare la potenza dell'mRNA, ovvero l'espressione della proteina target.
Metodo Analitico
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Analisi
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Metodi
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Test di Potenza
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Trasfertizione basata su cellule e identificazione della proteina target:
celle 293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7, ecc.
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Procedura
Passo 1. Trasfertizione basata su cellule con mRNA o mRNA-LNP
Le cellule vengono coltivate e trasfettate con mRNA o mRNA-LNP. In dettaglio, l'mRNA viene trasfettato dopo essere stato mescolato con un reagente di trasfertizione, mentre l'mRNA-LNP viene trasfettato direttamente nelle cellule. Dopo 24-48 ore, chiarire il soprannatante contenente la proteina espressa mediante centrifugazione.
Passo 2. Test Funzionali della Proteina Target
Eseguire analisi ELISA o WB per valutare il legame funzionale delle proteine bersaglio.
Studio di caso
Test di Potenza Basati su Cellule per Campioni mRNA
Yaohai-BioPharma ha sviluppato un metodo di test di potenza basato su cellule per l'mRNA, che include coltura cellulare, trasfezione cellulare e test funzionali di proteine. Abbiamo trasfettato mRNA eGFP, mRNA mCherry, mRNA luciferasi, mRNA proteina spike in cellule 293T, e abbiamo rilevato la proteina bersaglio attraverso segnali fluorescenti, luminescenti o colorati, WB, ELISA.
Test di Potenza Basati su Cellule per Prodotti mRNA da Yaohai Bio-Pharma
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