In confronto al capping enzimatico in due fasi, il metodo di capping co-trascrizionale in una fase può ridurre significativamente il flusso del processo. Il metodo è orientato al risultato e prevede l'aggiunta di analoghi di cap alla reazione di trascrizione in vitro (IVT). Gli analoghi di cap possono essere introdotti all'inizio della trascrizione, e si ottiene mRNA con struttura di cap al termine della trascrizione. Gli attuali analoghi di cap di terza generazione possono evitare il capping inverso e aggiungere direttamente la struttura Cap 1 al prodotto di trascrizione.
Per quanto riguarda l'immunogenicità in vivo dell'mRNA e l'efficienza di traduzione, il processo IVT utilizza spesso alcuni tipi di NTP modificati, e i nucleotidi comuni modificati sono pseudouridina (Ψ), N1-metil-pseudouridina (N1Ψ) e 5-metilcitosina (5mC).
Figura: Diagramma della Reazione di Co-trascrizione e Capping dell'mRNA
Dettagli del servizio
Servizio |
Dettagli del servizio |
Periodo di consegna (giornata lavorativa) |
Capping co-trascrizionale |
Risposta trasrizionale in vitro (analog Clean Cap) |
1-2 |
| Modifiche dei nucleotidi (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Rimozione del template DNA (DNase I) |
Ottimizzazione delle condizioni IVT - facoltativo |
Progettazione e ottimizzazione dei componenti della reazione |
3-7 |
Le nostre caratteristiche
- Strategie di Modifica Nucleotidica Diversificate
Più strategie facoltative di modifica dei nucleotidi possono migliorare l'espressione proteica.
- Sistema di Reazione Ottimizzato
Raggiungere un alto rapporto di trascrizione e un'efficienza di cappatura elevata.
- Processo di Cappatura Stabile
Raggiungere un tasso di cappatura superiore al 95%.
- Controllo rigoroso di RNase
Prevenire efficacemente la degradazione dell'mRNA attraverso un rigoroso controllo dell'RNase nell'ambiente sperimentale e nei consumabili.
Studio di caso
Yaohai Bio-Pharma ha sviluppato una piattaforma di processo di cappatura co-trascrizionale matura, utilizzando analoghi di cap puliti per aggiungere direttamente la struttura Cap1 evitando la cappatura inversa. Dopo un trattamento pre-campioni standardizzato e la rilevazione con elettroforesi capillare (CE), il tasso di cappatura della mRNA di proteina fluorescente verde betterata (eGFP) può raggiungere più del 95%.
efficienza di cappatura della mRNA eGFP superiore al 95%
La mRNA eGFP e la mRNA mCherry preparate tramite cappatura co-trascrizionale vengono trasferite rispettivamente in cellule 293T, ed è osservato un forte segnale fluorescente dopo 48h, indicando che la mRNA viene espressa in modo efficiente nelle cellule 293T.
Espressione della mRNA eGFP e mRNA mCherry nelle cellule 293T
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