Per quanto riguarda la preparazione batch dei precursori dell'RNA, un metodo comunemente utilizzato è la trascrizione in vitro (IVT). La reazione IVT utilizza DNA plasmidico linearizzato contenente il promotore T7 come modello e sintetizza un precursore di RNA con nucleosidi trifosfati (NTP) come substrato in presenza della RNA polimerasi T7.
I metodi di ciclizzazione in vitro includono la legatura chimica, la legatura enzimatica e il metodo PIE (introne-esone permutato). La legatura chimica e la legatura enzimatica sono adatte per la ciclizzazione di RNA più corti. Quando il frammento è più grande di 100 nt, la velocità di ciclizzazione diminuirà notevolmente. Al contrario, il metodo nucleasi basato sul sistema PIE può ottenere la ciclizzazione di sequenze da 8 kb.
Sotto la catalisi del guanosina trifosfato (GTP), la struttura PIE subisce ciclizzazione di sequenze extra-introne. In combinazione con una strategia ragionevole per aumentare il tasso di ciclizzazione, Yaohai Bio-Pharma può ottenere sequenze fino a 4 kb, con un'efficienza di ciclizzazione superiore all'80%.
La reazione di ciclizzazione in vitro dell'RNA avviene come segue:
Il precursore dell'RNA viene sintetizzato mediante trascrizione in vitro e il componente PIE completa l'auto-giunzione sotto la catalisi del GTP per formare circRNA.
Dettagli sui servizi
| Processo | i dettagli del servizio | Periodo di consegna (giorni lavorativi) |
| Trascrizione e circolazione in vitro | Conferma del sistema di reazione | 1-2 |
| Reazioni di trascrizione e ciclizzazione in vitro |
| Digestione con RNasi R |
| Ottimizzazione della reazione | Composizione della reazione, ottimizzazione dei tempi | 2-5 |
Le nostre caratteristiche
- Progettazione e ottimizzazione rigorosa dei test
È possibile ottenere fino a 4 kb di ciclizzazione dell'RNA.
- Elevata efficienza di ciclizzazione
Un tasso di ciclizzazione superiore all'80% può essere raggiunto attraverso una strategia di ottimizzazione della sequenza razionale.
- Controllo rigoroso della RNasi
Attraverso un controllo rigoroso delle RNasi nell'ambiente sperimentale e nei materiali di consumo, la degradazione dell'RNA viene efficacemente prevenuta.
Caso di studio
Ciclizzazione in vitro e arricchimento del circRNA
Basandosi sul sistema PIE, Yaohai Bio-Pharma ha ottimizzato la sequenza del circRNA, con un tasso di ciclizzazione superiore all'80% mediante elettroforesi su gel di agarosio (AGE). Utilizzando RNasi R per arricchire il circRNA, i risultati dell'elettroforesi su gel E mostrano che il precursore lineare dell'RNA viene digerito e, dopo un'ulteriore purificazione, la maggior parte del circRNA intaccato può essere rimosso. La soluzione di purificazione è stata sviluppata autonomamente da Yaohai Bio-Pharma.
Circolazione in vitro e arricchimento del circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
