I legami disolfuro sono talvolta chiamati legami SS o ponti disolfuro. I ponti disolfuro influenzano la bioattività dei prodotti biologici, come peptidi, proteine e anticorpi.
Yaohai Bio-Pharma offre servizi di analisi dei legami disolfuro basati principalmente sulla cromatografia liquida-spettrometria di massa (LC-MS).
Siamo stati coinvolti nella caratterizzazione strutturale proteica di varie molecole di grandi dimensioni, inclusi vaccini con subunità ricombinanti, nanocorpi/VHH/anticorpi a dominio singolo (sdAb), frammenti di anticorpi, ormoni/peptidi, citochine, fattori di crescita (GF), enzimi, collageni, eccetera.
Requisiti normativi per i legami disolfuro
Esistono diversi numeri e formazioni di ponti disolfuro in diversi prodotti biologici, che dovrebbero essere completamente valutati durante gli studi di caratterizzazione proteica se la sequenza aminoacidica primaria attesa del prodotto contiene l'amminoacido cisteina. Ciò è richiesto anche dal documento normativo ICH Topic Q6B.
Metodi analitici
| Analisi |
Metodi |
| Legami disolfuro |
Cromatografia liquida-spettrometria di massa (LC-MS) dopo la digestione |
Per i dati necessari per una valutazione completa dei ponti disolfuro e dei tioli liberi, gli scienziati della Yaohai Bio-pharma hanno condotto una mappatura dei peptidi post-digestione con una proteasi specifica. Successivamente analizzare utilizzando la spettrometria di massa a ionizzazione elettrospray/LC in linea (ES-MS) e/o LC/ES-MS/MS prima e dopo la riduzione.
Yaohai Bio-pharma può anche condurre il test di Ellman, che è una parte importante della valutazione di qualsiasi prodotto contenente completamente cisteina. Nell'ambito del test di Ellman, derivatizziamo i solfidrili utilizzando (5,5'-ditio-bis- [acido 2-nitrobenzoico]). Per determinare i livelli di tioli liberi, il prodotto risultante viene analizzato mediante spettrofotometria UV a 412 nm.
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