I legami disolfuro vengono talvolta chiamati legami S-S o ponti disolfuro. I ponti disolfuro influenzano la bioattività dei biologici, come peptidi, proteine e anticorpi.
Yaohai Bio-Pharma offre servizi di analisi dei legami disolfuro principalmente basati su Cromatografia Liquida - Spettrometria di Massa (LC-MS).
Siamo stati coinvolti nella Caratterizzazione Strutturale delle Proteine di vari grandi molecole, tra cui Vaccini Ricombinanti a Sottounita', Nanocorpi/VHHs/Corpi Antigenici Singolo-dominio (sdAbs), Frammenti di Antibodi, Ormoni/Peptidi, Cytokine, Fattori di Crescita (GF), Enzimi, Collagene, ecc.
Requisiti normativi per i legami disolfuro
Ci sono diversi numeri e formazioni di ponti disolfuro in diversi biologici, che devono essere pienamente valutati durante gli studi di caratterizzazione proteica se la sequenza primaria attesa degli amminoacidi del prodotto contiene l'amminoacido cisteina. Ciò è richiesto anche dal documento normativo ICH Topic Q6B.
Metodi Analitici
| Analisi |
Metodi |
| Legami Disolfuro |
Cromatografia Liquida a Fase Inversa - Spettrometria di Massa (LC-MS) dopo digestione |
Per i dati necessari per una valutazione completa dei ponti disolfuro e dei tioli liberi, gli scienziati di Yaohai Bio-pharma eseguono la mappatura dei peptidi post-digestione con una specifica proteasi. Successivamente, vengono analizzati utilizzando LC/ Ionizzazione a Spruzzo Elettrico Spettrometria di Massa (ES-MS) e/o LC/ES-MS/MS prima e dopo la riduzione.
Yaohai Bio-pharma può inoltre eseguire il test di Ellman, che è una parte importante di qualsiasi valutazione completa di prodotti contenenti Cisteina. All'interno del test di Ellman, derivatizziamo i gruppi tiolo utilizzando (5,5’-ditiobis-[2-nitrobenzoico]). Per determinare i livelli di tioli liberi, il prodotto risultante viene analizzato tramite spettrofotometria UV a 412nm.
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