Determinazione del peso molecolare mediante LC-MS
Il peso molecolare intatto è sempre stato riconosciuto come una caratteristica importante dei prodotti biologici. L'analisi del peso molecolare intatto viene utilizzata per dimostrare i prodotti proteici/peptidici e verificare i prodotti biologici. La misurazione del peso delle molecole è un requisito delle linee guida normative.
Yaohai Bio-Pharma offre analisi del peso molecolare intatto in condizioni native, ridotte e N-deglicosilate. Utilizziamo la cromatografia liquida-spettrometria di massa (LC-MS) per determinare il peso molecolare intatto.
Requisiti normativi per il peso molecolare
Nell'ICH Q6 si raccomanda che "il peso molecolare (o le dimensioni) sia determinato utilizzando la cromatografia ad esclusione dimensionale, l'elettroforesi su gel di poliacrilammide SDS (in condizioni riducenti e non riducenti), la spettrometria di massa (MS) e altre tecniche appropriate".
Metodi analitici
| Analisi |
Metodi |
| Peso molecolare |
LC-MS/cromatografia liquida/spettrometria di massa elettrospray (LC/ES-MS) di proteine o subunità native, ridotte, N-deglicosilate |
Procedure analitiche
Peso molecolare intatto:
- Esecuzione di LC-MS sul campione nativo ricevuto.
- Analisi dei dati LC-MS.
Peso Molecolare Ridotto:
- Trattare il campione proteico con un idoneo agente riducente;
- Esecuzione di LC-MS sulla proteina ridotta;
- Analisi dei dati LC-MS.
Peso Molecolare N-deglicosilato:
- Rimozione degli N-glicani con un enzima adatto;
- Esecuzione di LC-MS sulla proteina N-deglicosilata;
- Analisi dei dati LC-MS.
Peso Molecolare Ridotto e N-deglicosilato:
- Trattare il campione proteico con un idoneo agente riducente;
- Rimozione degli N-glicani con un enzima adatto;
- Esecuzione di LC-MS su proteine ridotte e N-deglicosilate;
- Analisi dei dati LC-MS.
Peso molecolare della subunità proteica:
- Scissione delle subunità
- Esecuzione di LC-MS sulla subunità proteica
- Analisi dei dati LC-MS
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