Determinazione del Peso Molecolare tramite LC-MS
Il peso molecolare integro è sempre stato riconosciuto come una caratteristica importante dei biologici. L'analisi del peso molecolare integro viene utilizzata per dimostrare i prodotti proteici/peptidici e verificare i biologici. La misurazione del peso molecolare è un requisito delle linee guida regolatorie.
Yaohai Bio-Pharma offre l'analisi del peso molecolare integro in condizioni native, ridotte e N-deglucosilate. Utilizziamo la Cromatografia Liquida-Spettrometria di Massa (LC-MS) per determinare il peso molecolare integro.
Requisiti Regolatori per il Peso Molecolare
Viene consigliato nell'ICH Q6 che “il peso molecolare (o dimensione) venga determinato utilizzando la cromatografia di esclusione dimensionale, l'elettroforesi su gel di poliacrilamide con SDS (in condizioni ridotte e non ridotte), la spettrometria di massa (MS) e altre tecniche appropriate”.
Metodi Analitici
| Analisi |
Metodi |
| Peso molecolare |
LC-MS / Cromatografia Liquida/Elettrospray Spettrometria di Massa (LC/ES-MS) di proteine native, ridotte, N-deglucosilate o sottounità |
Procedure Analitiche
Peso Molecolare Intatto:
- Esecuzione di LC-MS sul campione nativo ricevuto.
- Analisi dei dati di LC-MS.
Peso Molecolare Ridotto:
- Trattamento del campione proteico con un agente riducente adeguato;
- Esecuzione di LC-MS sulla proteina ridotta;
- Analisi dei dati di LC-MS.
Peso Molecolare N-deglucosilato:
- Rimozione degli N-glicani con un enzima appropriato;
- Esecuzione di LC-MS sul proteina N-deglucosilata;
- Analisi dei dati di LC-MS.
Peso molecolare ridotto e N-deglucosilato:
- Trattamento del campione proteico con un agente riducente adeguato;
- Rimozione degli N-glicani con un enzima appropriato;
- Esecuzione di LC-MS su proteina ridotta e N-deglucosilata;
- Analisi dei dati di LC-MS.
Peso molecolare del sottounità proteica:
- Cleavage del sottounità
- Esecuzione di LC-MS sul sottounità proteica
- Analisi dei dati di LC-MS
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