Yaohai Bio-Pharma offre servizi di test della sequenza N-terminale e di analisi dei dati basati sulla cromatografia liquida-spettrometria di massa (LC-MS) o sul metodo di degradazione di Edman, che consente di determinare gli amminoacidi ai rispettivi terminali delle proteine di interesse. La modificazione N-terminale può anche essere analizzata mediante LC-MS.
Siamo stati coinvolti nella caratterizzazione strutturale proteica di varie molecole di grandi dimensioni, inclusi vaccini con subunità ricombinanti, nanocorpi/VHH/anticorpi a dominio singolo (sdAb), frammenti di anticorpi, ormoni/peptidi, citochine, fattori di crescita (GF), enzimi, collageni, eccetera.
Requisiti normativi per il sequenziamento del terminale N
Secondo le linee guida ICH Q6B, è necessario confermare la sequenza della proteina ed esaminare le estremità per individuare eventuali variazioni.
Metodi di sequenziamento dei terminali N
| Analisi |
Metodo |
| Sequenziamento N-terminale |
Degradazione di Edman, cromatografia liquida-spettrometria di massa (LC-MS) |
Procedure
LC-MS
1. Etichettatura fluorescente delle proteine N-terminale
2. Digestione multipla
3. Analisi LC-MS/spettrometria di massa (MS).
Degrado di Edman
1. Elettroforesi su gel con sodio dodecil solfato (SDS) della proteina target
2. Trasferire il gel sulle membrane di polivinilidene fluoruro (PVDF) e colorare
3. Identificare e tagliare la banda proteica bersaglio
4. Sequenziamento di Edman dell'N-terminale
5. Analisi dei dati
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