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Enzimi per la produzione di mRNA

Enzimi per la produzione di mRNA

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Enzimi per la produzione di RNA

Enzimi chiave per la produzione di RNA lungo

L’mRNA, come un tipo di RNA a codifica lunga, ha funzionato in modo sicuro ed efficiente in una gamma più ampia di persone durante il COVID-19. Anche altri RNA a codifica lunga, come l’RNA autoamplificante (saRNA) e l’mRNA circolare (circRNA), hanno mostrato efficienza negli studi preclinici e clinici.

La produzione su larga scala di RNA a codifica lunga si basa sulla trascrizione in vitro (IVT) mediante diverse reazioni enzimatiche. Le fasi della produzione dell'RNA includono la preparazione del DNA modello, la sintesi dell'RNA IVT, la circolazione, la rimozione del DNA, la modifica dell'RNA (capping e tailing) e la purificazione dell'RNA.

Esistono diversi enzimi chiave utilizzati nella produzione di RNA a codifica lunga (p. es., mRNA, saRNA e circRNA), tra cui endonucleasi di restrizione, T7 RNA polimerasi (T7 RNAP), inibitore della RNasi, pirofosfatasi inorganica, DNasi I, enzima di capping vaccinico e RNasi R.

Processo

Enzima

Funzione

Preparazione del DNA modello

Endonucleasi di restrizione

Linearizzazione del DNA plasmidico (pDNA) per evitare di generare trascrizioni più lunghe.

Sintesi dell'RNA IVT

T7 RNA polimerasi (T7 RNAP)

Si legano al promotore T7 e generano una trascrizione di RNA specifica; Gioca un ruolo chiave durante la reazione IVT.

Inibitore della RNasi, ricombinante

Inibisce l'attività della RNasi durante la reazione IVT.

Pirofosfatasi inorganica (iPPasi)

Prevenire il pirofosfato durante la reazione IVT.

Rimozione del DNA

DNasi I

Rimuovere il modello di DNA.

Modificazione dell'RNA

Enzima di copertura dei vaccini

Aggiungi strutture Cap1 alle estremità 5' dell'mRNA IVT.

2'-O-metiltransfera

Arricchimento del circRNA

RNasi R

Digerire l'RNA lineare e arricchire l'RNA circolare.

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