Reagente enzimatico

Modalità

Proteasi per la Rimozione dei Tag

Per migliorare la solubilità e semplificare il processo di purificazione delle proteine ricombinanti, i ricercatori aggiungono di solito tag di fusione, tra cui His-tag, proteina legante alla maltose (MBP) e glutation-S-transferasi (GST), comunemente utilizzati.

Sebbene vengano marcati come una sequenza extra di proteina, devono essere rimossi per mantenere l'attività biologica nell'industria farmaceutica. La rimozione dei tag di fusione richiede proteasi sito-specifiche, come enterochimesi (EK), trombina, proteasi del virus etch del tabacco (TEVp), proteasi virale umana 3C (HRV3C), proteasi SUMO (piccola proteina modificatrice ubiquitina), proteasi del virus del mosaico venoso del tabacco (TVMV) e peptidasi carbossil-terminale A/B (CPA/CPB).

TIPO	Enzima	Sito di Riconoscimento
Endoproteasi per la Rimozione dei Tag	Enterochina (EK), enteropeptidasi	DDDDK↓
	Trombina	LVPR↓GS
	Proteasi TEV	ENLYFQ↓G
	Proteasi HRV3C	LEVLFQ↓GP
	Proteasi SUMO	Struttura terziaria SUMO
	Proteasi TVMV	ETVRFQG↓S
Esoproteasi per rimozione dei tag	Carbossipeptidasi A (CPA)	Aminoacidi terminali C, eccetto Pro, Lys e Arg
Esoproteasi per rimozione dei tag	Carbossipeptidasi B (CPB)	Lys e Arg terminali C

Altre proteasi

APPLICAZIONE	Enzima	Funzione
Altre proteasi	Proteasi K	Una serina proteasi che digerisce le proteine idrolizzando i legami peptidici.
	IdeS, IgG proteasi	Enzimi degradanti IgG (Ides) che tagliano in un sito specifico dell'immunoglobulina G (IgG), generando frammenti Fab e Fc
	Proteasi IgA1	Un enzima proteolitico che taglia un sito specifico nella sequenza della regione cardine dell'immunoglobulina A1 (IgA1) umana.

Nuclease

APPLICAZIONE	Enzima	Funzione
Nuclease	Nuclease	Taglia gli acidi nucleici (DNA o RNA) idrolizzando i legami fosfodiesterici.
Nuclease	Restrict enzima	Un endonucleasi che taglia il DNA a o vicino a siti specifici.

Amidasi

APPLICAZIONE	Enzima	Funzione
Amidasi	PNGase F	Taglia tra il GlcNAc più interno e i residui di asparagina degli oligosaccaridi ad alta mannosa, ibridi e complessi.

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